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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真菌DNA提取疑惑
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jilly

新虫 (小有名气)

[求助] 真菌DNA提取疑惑

提取步骤如下：
1、用提取裂解缓冲液（2%TRITON、1%SDS、100mM Tris-HCl (pH8.0), 50mM EDTA (pH8.0), 500mM NaCl）300uL悬浮菌体；
2、向Epperdofr管中加入0.5克的玻璃珠和50uL的10%SDS，在涡旋器上以其最大速率涡旋10--20min；

3、加入2倍体积即600uL的6.5M异硫氢酸胍（含50mM Tris-Cl，pH为5.8），充分混匀后，12000RPM离心3分钟

4、吸取上清加300--400uL的异丙醇，充分混匀后分两次上柱，12000RPM离心30秒；

5、70%酒精洗涤一次，12000RPM离心30秒

6、倒掉酒精后，12000RPM离心2分钟

7、加入50UL 10mM Tris，12000RPM离心45秒

8、点10UL电泳



结果：用1OD 1ML大肠杆菌来做，提的DNA浓度高，有10-20ng/uL

        用1OD 1ML烟曲霉来做，却提不出任何DNA，但玻璃珠振荡裂解后，加无水乙醇直接沉淀，点电泳，却能看见亮带。（不知道为何会这样的结果）

     为什么会是这样的结果呢，希望有人帮帮我。先谢了
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1楼 2012-07-12 16:09:34
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jilly

新虫 (小有名气)
怎么没人能帮助一下我呀
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2楼2012-07-13 16:23:31
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547star

木虫 (著名写手)
论坛里有其他方法,你可以考虑试试.
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为什么
3楼2012-07-13 17:46:51
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jilly

新虫 (小有名气)
谢谢，请问知不知道有更好的曲霉等真菌好的破壁方法?
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4楼2012-07-24 10:51:13
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

真菌的DNA应该挺好提的，我用的天根的新型植物DNA提取试剂盒，效果还行，你可以试试！
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低调稳重务实内敛---------------残
5楼2012-07-24 17:26:45
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liyaya2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你用CTAB法试试，我们都用这个方法提真菌的，效果一直不错。
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6楼2012-07-24 21:27:24
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jilly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by liyaya2012 at 2012-07-24 21:27:24
你用CTAB法试试，我们都用这个方法提真菌的，效果一直不错。

请问能告诉我具体一点的步骤吗？
用什么破壁呢？
非常感谢
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7楼2012-07-25 10:11:45
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jilly at 2012-07-25 10:11:45
请问能告诉我具体一点的步骤吗？
用什么破壁呢？
非常感谢...

加到PE管里面，如水分比较多用吸水纸吸干，再加入子弹头或者铁珠，在液氮里面冻啦直接打就行啦!
赞一下 回复此楼
低调稳重务实内敛---------------残
8楼2012-07-25 10:28:35
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jilly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jilly at 2012-07-25 10:11:45
请问能告诉我具体一点的步骤吗？
用什么破壁呢？
非常感谢...

我这个是个病原菌，用液氮研磨好像不太现实，对吧
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9楼2012-07-26 09:22:08
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jilly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wu_shiyong at 2012-07-25 10:28:35
加到PE管里面，如水分比较多用吸水纸吸干，再加入子弹头或者铁珠，在液氮里面冻啦直接打就行啦!...

非常感谢！
我这个是病原菌，好像用液氮研磨不太现实，对吧。
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10楼2012-07-26 09:24:27
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