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jilly

新虫 (小有名气)

[求助] 真菌DNA提取疑惑

提取步骤如下:
1、用提取裂解缓冲液(2%TRITON、1%SDS、100mM Tris-HCl (pH8.0), 50mM EDTA (pH8.0), 500mM NaCl)300uL悬浮菌体;
2、向Epperdofr管中加入0.5克的玻璃珠和50uL的10%SDS,在涡旋器上以其最大速率涡旋10--20min;

3、加入2倍体积即600uL的6.5M异硫氢酸胍(含50mM Tris-Cl,pH为5.8),充分混匀后,12000RPM离心3分钟

4、吸取上清加300--400uL的异丙醇,充分混匀后分两次上柱,12000RPM离心30秒;

5、70%酒精洗涤一次,12000RPM离心30秒

6、倒掉酒精后,12000RPM离心2分钟

7、加入50UL 10mM Tris,12000RPM离心45秒

8、点10UL电泳



结果:用1OD 1ML大肠杆菌来做,提的DNA浓度高,有10-20ng/uL

        用1OD 1ML烟曲霉来做,却提不出任何DNA,但玻璃珠振荡裂解后,加无水乙醇直接沉淀,点电泳,却能看见亮带。(不知道为何会这样的结果)

     为什么会是这样的结果呢,希望有人帮帮我。先谢了
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wu_shiyong

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by jilly at 2012-07-25 10:11:45
请问能告诉我具体一点的步骤吗?
用什么破壁呢?
非常感谢...

加到PE管里面,如水分比较多用吸水纸吸干,再加入子弹头或者铁珠,在液氮里面冻啦直接打就行啦!
低调稳重务实内敛---------------残
8楼2012-07-25 10:28:35
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查看全部 13 个回答

jilly

新虫 (小有名气)

怎么没人能帮助一下我呀
2楼2012-07-13 16:23:31
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547star

木虫 (著名写手)

论坛里有其他方法,你可以考虑试试.
为什么
3楼2012-07-13 17:46:51
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jilly

新虫 (小有名气)

谢谢,请问知不知道有更好的曲霉等真菌好的破壁方法?
4楼2012-07-24 10:51:13
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