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君子婷

银虫 (小有名气)

[求助] 怎样测RNA浓度

各位师兄师姐,我最近打算用Kit试剂盒提取总RNA,请问怎样测定提取后RNA的浓度啊?谢谢啦!
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再见,青春
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
君子婷: 回帖置顶 2012-07-07 08:25:25
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很好的经验建议哦 2012-07-07 13:45:58
引用回帖:
7楼: Originally posted by 君子婷 at 2012-07-04 11:53:26
Nanodrop灵敏度与准确度高吗?...

看你的实验要求了
如果你的RNA浓度偏低,而且你要高精确的定量分析:建议上 nano chip,有效测定范围在0.5ng/ul到50ng/ul,如果浓度低于这个,可以采用pico chip。
Nanodrop的话,一般浓度在40ng/ul以上的样品,定量还是比较准的,低于这个浓度,Nanodrop就不行了,因为我经常同时做chip和drop两种检测,所以这方面的经验还是有一些。
至于紫外分光光度计法,这个没试过,其实Nanodrop就是一种程序化的紫外分光光度计法,只不过流水线化做成一台仪器了,直接给值的,很方便。
另外chip的操作相对复杂,你自己取舍了。但是一般用作next generation sequencing的RNA,感觉nanochip是定量常规检测。至于一般要求的RNA,nanodrop检测可以满足要求。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

生活是美好的
18楼2012-07-06 18:07:54
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-06 13:40:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 君子婷 at 2012-07-03 20:59:24
测260,280值是确定RNA的纯度吧?那怎样知道RNA的浓度呢?因为以前没做过,还请多多指教,呵呵。...

260和280的比值表示的是你提取RNA的好坏,然后通过260的值可以大致算出RNA的浓度,公式就是RNA浓度=A260X稀释倍数X40 ug/mL
4楼2012-07-03 21:17:23
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普通回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般我就是通过紫外吸收测260,280的值,然后大致定一下量。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2012-07-03 20:51:10
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君子婷

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-07-03 20:51:10
一般我就是通过紫外吸收测260,280的值,然后大致定一下量。

测260,280值是确定RNA的纯度吧?那怎样知道RNA的浓度呢?因为以前没做过,还请多多指教,呵呵。
再见,青春
3楼2012-07-03 20:59:24
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君子婷

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-07-03 21:17:23
260和280的比值表示的是你提取RNA的好坏,然后通过260的值可以大致算出RNA的浓度,公式就是RNA浓度=A260X稀释倍数X40 ug/mL...

明白了,谢谢哈!
再见,青春
5楼2012-07-03 21:48:00
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
简单点的方法,直接用Nanodrop或者Qubit来测定

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6楼2012-07-04 08:59:51
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君子婷

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-07-04 08:59:51
简单点的方法,直接用Nanodrop或者Qubit来测定

Nanodrop灵敏度与准确度高吗?
再见,青春
7楼2012-07-04 10:53:26
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
nanaodrop测,就可以知道浓度,以及是否有污染

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

8楼2012-07-04 12:43:00
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-06 13:40:27
引用回帖:
7楼: Originally posted by 君子婷 at 2012-07-04 10:53:26
Nanodrop灵敏度与准确度高吗?...

Nanodrop需要的样品量少,不需要做标准曲线,2秒出结果。一般10ng/ul浓度以上的用它来测定较准确。如果浓度才几ng,就可能不准确,用Qubit更适合
9楼2012-07-04 15:14:04
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君子婷

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by jimjohntall at 2012-07-04 12:43:00
nanaodrop测,就可以知道浓度,以及是否有污染

我想让导师买的,导师说他在美国用过,觉得不咋样。咋办啦?
再见,青春
10楼2012-07-04 15:18:24
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