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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎样测RNA浓度
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本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

君子婷

银虫 (小有名气)

[求助] 怎样测RNA浓度

各位师兄师姐，我最近打算用Kit试剂盒提取总RNA，请问怎样测定提取后RNA的浓度啊？谢谢啦！
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再见，青春
1楼 2012-07-03 20:33:39
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
君子婷: 回帖置顶 2012-07-07 08:25:25
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 很好的经验建议哦 2012-07-07 13:45:58
引用回帖:
7楼: Originally posted by 君子婷 at 2012-07-04 11:53:26
Nanodrop灵敏度与准确度高吗？...

看你的实验要求了
如果你的RNA浓度偏低，而且你要高精确的定量分析：建议上 nano chip，有效测定范围在0.5ng/ul到50ng/ul，如果浓度低于这个，可以采用pico chip。
Nanodrop的话，一般浓度在40ng/ul以上的样品，定量还是比较准的，低于这个浓度，Nanodrop就不行了，因为我经常同时做chip和drop两种检测，所以这方面的经验还是有一些。
至于紫外分光光度计法，这个没试过，其实Nanodrop就是一种程序化的紫外分光光度计法，只不过流水线化做成一台仪器了，直接给值的，很方便。
另外chip的操作相对复杂，你自己取舍了。但是一般用作next generation sequencing的RNA，感觉nanochip是定量常规检测。至于一般要求的RNA，nanodrop检测可以满足要求。
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君子婷
生活是美好的
18楼2012-07-06 18:07:54
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-06 13:40:12
引用回帖:
3楼: Originally posted by 君子婷 at 2012-07-03 20:59:24
测260，280值是确定RNA的纯度吧？那怎样知道RNA的浓度呢？因为以前没做过，还请多多指教，呵呵。...

260和280的比值表示的是你提取RNA的好坏，然后通过260的值可以大致算出RNA的浓度，公式就是RNA浓度=A260X稀释倍数X40 ug/mL
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4楼2012-07-03 21:17:23
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普通回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般我就是通过紫外吸收测260，280的值，然后大致定一下量。
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君子婷
2楼2012-07-03 20:51:10
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君子婷

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-07-03 20:51:10
一般我就是通过紫外吸收测260，280的值，然后大致定一下量。

测260，280值是确定RNA的纯度吧？那怎样知道RNA的浓度呢？因为以前没做过，还请多多指教，呵呵。
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再见，青春
3楼2012-07-03 20:59:24
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君子婷

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-07-03 21:17:23
260和280的比值表示的是你提取RNA的好坏，然后通过260的值可以大致算出RNA的浓度，公式就是RNA浓度=A260X稀释倍数X40 ug/mL...

明白了，谢谢哈！
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再见，青春
5楼2012-07-03 21:48:00
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
简单点的方法，直接用Nanodrop或者Qubit来测定
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君子婷
6楼2012-07-04 08:59:51
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君子婷

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-07-04 08:59:51
简单点的方法，直接用Nanodrop或者Qubit来测定

Nanodrop灵敏度与准确度高吗？
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再见，青春
7楼2012-07-04 10:53:26
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
nanaodrop测，就可以知道浓度，以及是否有污染
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君子婷
8楼2012-07-04 12:43:00
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-06 13:40:27
引用回帖:
7楼: Originally posted by 君子婷 at 2012-07-04 10:53:26
Nanodrop灵敏度与准确度高吗？...

Nanodrop需要的样品量少，不需要做标准曲线，2秒出结果。一般10ng/ul浓度以上的用它来测定较准确。如果浓度才几ng，就可能不准确，用Qubit更适合
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9楼2012-07-04 15:14:04
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君子婷

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by jimjohntall at 2012-07-04 12:43:00
nanaodrop测，就可以知道浓度，以及是否有污染

我想让导师买的，导师说他在美国用过，觉得不咋样。咋办啦？
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再见，青春
10楼2012-07-04 15:18:24
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