| 查看: 4957 | 回复: 6 | ||
[求助]
以酵母基因组为模板进行PCR扩增没有条带
|
|
实验室有三株构建好的毕赤酵母工程菌 都带有我需要的目的基因（大小约为2kb） 我用酵母基因组提取试剂盒分别提取了三者的基因组 用目的基因的上下游引物进行PCR扩增 使用的是Taq酶（想要先确保能够扩增出来再使用高保真酶） 预变性94℃×5min 变性94℃×30s 退火55℃×30s 延伸72℃×2min 补延伸72℃×10min 4℃∞ 30个循环 其中只有一种酵母基因组扩增出了我要的条带 但是测序表明有很多点突变和碱基缺失 后来我改变退火温度51，53，55，57，59都试过 每次都带有P得出结果的那个基因组做对照 还是没条带 我想请教一下： 1.如何能从另两种酵母基因组扩增出条带？ 2.就算扩增出条带，能够保证测序正确么？为什么穿梭质粒构建好了也测序正确的，重组到酵母基因组中之后再次扩增目的基因会有这么多的缺失和点突变呢？如果缺失和突变不能避免，那么用酵母基因组作为模板可靠吗？ 多谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有55人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱 求助
已经有3人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 酿酒酵母基因组PCR出了16S的条带
已经有8人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？
已经有17人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR扩增模板精确定量:两个拷贝or三个拷贝的试验方法
已经有12人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
2楼2012-07-04 16:05:24
caoluoyuan
金虫 (正式写手)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 1465.1
- 红花: 3
- 帖子: 326
- 在线: 71.1小时
- 虫号: 489157
- 注册: 2008-01-01
- 性别: GG
- 专业: 中医药学研究新技术和新方
3楼2012-07-04 17:01:01
4楼2012-07-05 09:10:51
5楼2012-07-05 23:41:31
6楼2012-07-06 08:45:50
yaolinlshang
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1364.9
- 散金: 79
- 红花: 29
- 帖子: 394
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1091998
- 注册: 2010-09-07
- 性别: MM
- 专业: 色谱分析
7楼2012-09-17 11:15:19
40