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以酵母基因组为模板进行PCR扩增没有条带
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实验室有三株构建好的毕赤酵母工程菌 都带有我需要的目的基因（大小约为2kb） 我用酵母基因组提取试剂盒分别提取了三者的基因组 用目的基因的上下游引物进行PCR扩增 使用的是Taq酶（想要先确保能够扩增出来再使用高保真酶） 预变性94℃×5min 变性94℃×30s 退火55℃×30s 延伸72℃×2min 补延伸72℃×10min 4℃∞ 30个循环 其中只有一种酵母基因组扩增出了我要的条带 但是测序表明有很多点突变和碱基缺失 后来我改变退火温度51，53，55，57，59都试过 每次都带有P得出结果的那个基因组做对照 还是没条带 我想请教一下： 1.如何能从另两种酵母基因组扩增出条带？ 2.就算扩增出条带，能够保证测序正确么？为什么穿梭质粒构建好了也测序正确的，重组到酵母基因组中之后再次扩增目的基因会有这么多的缺失和点突变呢？如果缺失和突变不能避免，那么用酵母基因组作为模板可靠吗？ 多谢！！！ |
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yaolinlshang
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