| 查看: 3009 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
以酵母基因组为模板进行PCR扩增没有条带
|
||
|
实验室有三株构建好的毕赤酵母工程菌 都带有我需要的目的基因（大小约为2kb） 我用酵母基因组提取试剂盒分别提取了三者的基因组 用目的基因的上下游引物进行PCR扩增 使用的是Taq酶（想要先确保能够扩增出来再使用高保真酶） 预变性94℃×5min 变性94℃×30s 退火55℃×30s 延伸72℃×2min 补延伸72℃×10min 4℃∞ 30个循环 其中只有一种酵母基因组扩增出了我要的条带 但是测序表明有很多点突变和碱基缺失 后来我改变退火温度51，53，55，57，59都试过 每次都带有P得出结果的那个基因组做对照 还是没条带 我想请教一下： 1.如何能从另两种酵母基因组扩增出条带？ 2.就算扩增出条带，能够保证测序正确么？为什么穿梭质粒构建好了也测序正确的，重组到酵母基因组中之后再次扩增目的基因会有这么多的缺失和点突变呢？如果缺失和突变不能避免，那么用酵母基因组作为模板可靠吗？ 多谢！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有52人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因组DNA为模板 做PCR 为何P不出其对应的基因组序列?
已经有8人回复
- 基因工程课程小结
已经有20人回复
- 基因组dna检测条带很亮 PCR扩增后条带非常弱 求助
已经有3人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- 酿酒酵母基因组PCR出了16S的条带
已经有8人回复
- 基因组中长片段PCR应该注意的几个问题
已经有14人回复
- 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？
已经有17人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- 【资料】分子生物学常见问题解答
已经有30人回复
- 【求助/交流】PCR后没有目的条带，有非特异性条带，求解决办法？？
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR扩增模板精确定量:两个拷贝or三个拷贝的试验方法
已经有12人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
yaolinlshang
金虫 (正式写手)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1364.9
- 散金: 79
- 红花: 29
- 帖子: 394
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1091998
- 注册: 2010-09-07
- 性别: MM
- 专业: 色谱分析
7楼2012-09-17 11:15:19