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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)

[求助] 菌液pcr出来后，质粒提不出，测序老失败？

转化之后，在板子上挑了几个，菌落摇菌。

然后用自己的片段的特异性引物做了菌液pcr。全部是阳性。

之后又对阳性菌落划线，再挑了摇菌。又做了菌液pcr。

可是提取质粒都没有条带，测序也没有成功，很郁闷。不知道哪里出了问题~各位做过菌液pcr的高手，请帮帮忙~~~~
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1楼2012-06-27 09:55:51
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sk_yb

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提质粒的问题。多收集点菌液。提完质粒测个浓度再去测序。
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5楼2012-06-27 20:39:38
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淘气维尼89

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液pcr设对照了没？一般来说不会全是阳性的，你这个全是阳性，比例太高了。做好做个对照比较一下
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2楼2012-06-27 18:05:05
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lyweichen

铁虫 (小有名气)
我通常菌液PCR完后，阳性的直接试管摇菌，提质粒。PCR最好设对照。
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emma立夏
3楼2012-06-27 19:38:17
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emma立夏

铁虫 (初入文坛)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by lyweichen at 2012-06-27 19:38:17
我通常菌液PCR完后，阳性的直接试管摇菌，提质粒。PCR最好设对照。

请问一下，对照一般怎么设呢？谢谢，这块领域真的不是很熟悉~！
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4楼2012-06-27 19:44:25
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