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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » DEAE-52纤维素柱求助
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guoyongyue

新虫 (初入文坛)

[求助] DEAE-52纤维素柱求助 已有2人参与

现在在做食用菌子实体多糖的分离纯化，我用的是DEAE-52的纤维素柱，用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脱，1.25ml/min，上样量是1mg/ml 的多糖10ml，每管收集5ml，过了两次，也有峰，但是纯品太少，没办法富集，还想拿到纯品，怎么办呢？
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1楼 2012-06-13 10:09:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lezai945

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2012-11-16 20:30:51
多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
建议二：你上样量。可以稍稍加大点多糖的上样量。
建议三：多糖的浓度。你上样上了10ml。尽量减小上样体积，提高多糖浓度。
建议四：梯度洗脱的浓度选择。0.05-0.5这个浓度，你是随便选择的。什么浓度是最适合的，是需要实验依据的。你有两种方案选择：1、阶段性梯度洗脱：洗脱液的浓度从0、到2mol/L，选择适当的不同浓度，有低到高依次洗脱并分别收集。2、线性连续性梯度洗脱：洗脱浓度是从0-2mol/L，成线性、连续性洗脱，这种线性浓度你可以在去离子水中一边接入柱子，一边同时匀速加入高浓度的洗脱液2mol/L，同时不断搅拌（磁力搅拌器），使溶液浓度从0慢慢逐步提高。
建议四：你要对以上收集的收集液，逐管或者隔管检测多糖含量，从而来确定主峰的位置。以便选择适当的洗脱浓度，从而优化实验参数。
建议四：细心、耐心加毅力。
祝你试验成功。
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10楼2012-11-16 11:16:22
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zhh8672

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
guoyongyue: 金币+10, ★★★很有帮助, 有帮助 2012-06-15 11:29:45
有几个峰呢？建议从水开始，慢慢的把盐离子浓度增大，一般DEAE收集的组分可以将峰两边一起收集，只用这个填料很难得到高纯度的样品，还需要进一步的分离
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5楼2012-06-15 08:57:06
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wenowen

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你好，我现在也在摸索多糖纯化的条件，可以留个联系方式互相交流吗？
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9楼2012-10-09 09:10:44
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普通回帖

guoyongyue

新虫 (初入文坛)
求助求助啊
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2楼2012-06-13 10:15:25
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主
非应助，自己也是在学习中，DE52不耐压，如果加大盐离子浓度可以不？不梯度洗脱，直接用一较高盐离子浓度洗脱液洗脱
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guoyongyue
太胖了！~
3楼2012-06-13 21:27:50
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guoyongyue

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by hsd3521 at 2012-06-13 21:27:50
非应助，自己也是在学习中，DE52不耐压，如果加大盐离子浓度可以不？不梯度洗脱，直接用一较高盐离子浓度洗脱液洗脱

好像不行~
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4楼2012-06-13 21:52:31
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guoyongyue

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhh8672 at 2012-06-15 08:57:06
有几个峰呢？建议从水开始，慢慢的把盐离子浓度增大，一般DEAE收集的组分可以将峰两边一起收集，只用这个填料很难得到高纯度的样品，还需要进一步的分离

每次用一种洗脱液，都有一个峰。但是，我的样品很奇怪，形成的是多糖胶体似的，不是溶液，和水要经过强烈搅拌才和水溶解，不知道是什么东西。上样少了不能富集，多了又飘起来，飘在柱子顶端，我都愁死了
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6楼2012-06-15 11:32:30
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calm277

铜虫 (小有名气)
建议查看资料或者找专业认识交流！
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7楼2012-06-15 15:08:52
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zhh8672

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
树树8013: 金币+2, 谢谢解答交流，欢迎常来咱们自己的板块转转。 2012-06-16 20:21:52
引用回帖:
6楼: Originally posted by guoyongyue at 2012-06-15 11:32:30
每次用一种洗脱液，都有一个峰。但是，我的样品很奇怪，形成的是多糖胶体似的，不是溶液，和水要经过强烈搅拌才和水溶解，不知道是什么东西。上样少了不能富集，多了又飘起来，飘在柱子顶端，我都愁死了...

这很正常，真菌多糖很多都是胶体，建议加热或盐溶液溶解，每次用一种洗脱液都有一个峰也很正常，主要是看哪个峰是主要成分，不知道你的柱子规格，一次进样10mg是有点少，需要很长时间才能得到足够的量啊，呵呵
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8楼2012-06-16 08:29:47
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