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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » DEAE-52纤维素柱求助
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wsh2454

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lezai945 at 2012-11-16 11:16:22
多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
...

您好，我最近做多糖的纯化，之前有实验室的人留下了SephadexG-100，和DEAE-52，放到冰箱很久，想问一下还能用么？如果能用怎么处理再生？谢谢
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11楼2012-12-16 10:57:00
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0700810107

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by guoyongyue at 2012-06-15 11:32:30
每次用一种洗脱液，都有一个峰。但是，我的样品很奇怪，形成的是多糖胶体似的，不是溶液，和水要经过强烈搅拌才和水溶解，不知道是什么东西。上样少了不能富集，多了又飘起来，飘在柱子顶端，我都愁死了...

楼主问题解决了没？我也在做真菌多糖纯化，过柱子前我把不溶解的给离心掉了，但是发现收集到的多糖分子量只有几千了，真伤不起了，你有什么好的方法吗？
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12楼2013-05-09 09:18:34
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乖乖生的命途

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
13楼2013-05-28 15:46:27
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小蒋

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议你每管收集10ml，每10分钟做一个点，先确定浓度高的时间段，几个不同组分时间段可能不同，把对应的时间段的收集液聚集在一起，在旋蒸浓缩，再不同组分分开，多次过柱，但是光光用DEAE-52的纤维素柱这种离子交换柱来分析你这种天然产物，分析效果不会很好的，一些相似的成分是分不开的，我做竹叶多糖的分离时，在使用离子交换柱后，还要过Sepharose柱，分离效果就很好了，只要分离次数控制得好，相似度很高的成分也能分开，就是Sepharose填料很贵。
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我想我会的。
14楼2013-05-28 17:49:43
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神雕哥

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

DEAE一般采用粗短的柱子，你上样量太少，你也没说你的填料体积，建议换大点，你可以试试XK2.6*20的，加大你的上样量，收集峰，重复几次，将相同峰位溶液合并，然后透析除盐，浓缩，冷冻干燥，即可得到你的样品
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15楼2013-07-26 11:41:20
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cpu_haoxia

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhh8672 at 2012-06-15 08:57:06
有几个峰呢？建议从水开始，慢慢的把盐离子浓度增大，一般DEAE收集的组分可以将峰两边一起收集，只用这个填料很难得到高纯度的样品，还需要进一步的分离

如果是进一步分离，应该选择什么方法呢？
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相信自己
16楼2014-11-14 15:09:37
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可爱的KFC

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by guoyongyue at 2012-06-15 11:32:30
每次用一种洗脱液，都有一个峰。但是，我的样品很奇怪，形成的是多糖胶体似的，不是溶液，和水要经过强烈搅拌才和水溶解，不知道是什么东西。上样少了不能富集，多了又飘起来，飘在柱子顶端，我都愁死了...

上样后让样品渗入树脂，再用纯水冲柱把样品挂在上面。

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17楼2014-11-22 15:17:28
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zhangyi_ppls

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lezai945 at 2012-11-16 11:16:22
多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
...

请问能留个联系方式吗？现在在研究多糖的纯化，有些问题
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18楼2015-05-18 21:21:57
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lezai945 at 2012-11-16 11:16:22
多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
...

你好我在做一种蛋白分分离纯化工艺，
目前流程是这样：大肠杆菌中诱导表达，破碎取上清直接过离子交换再过分子筛；
只是探索下条件，而且我没有做过，有几个问题想问一下：
1：破碎后的上清可以直接过离子交换吗？一般的离子交换柱子应该用多大的？怎样选择？
我买了一个10cm的小柱子，打算装2ml的柱床可以吗？上样量有没有要求？
2：我的目的蛋白是19.8KD，过分子筛用sephadex-G50可以吗？这个柱子应该用多大的可以？
这方面接触比较少，还希望不吝赐教
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简简单单才是真
19楼2016-03-22 14:56:17
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小橘子2013

新虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by lezai945 at 2012-11-16 11:16:22
多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
...

你好我在做一种蛋白分分离纯化工艺，
目前流程是这样：大肠杆菌中诱导表达，破碎取上清直接过离子交换再过分子筛；
只是探索下条件，而且我没有做过，有几个问题想问一下：
1：破碎后的上清可以直接过离子交换吗？一般的离子交换柱子应该用多大的？怎样选择？
我买了一个10cm的小柱子，打算装2ml的柱床可以吗？上样量有没有要求？
2：我的目的蛋白是19.8KD，过分子筛用sephadex-G50可以吗？这个柱子应该用多大的可以？
这方面接触比较少，还希望不吝赐教
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简简单单才是真
20楼2016-03-22 14:57:57
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