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guoyongyue

新虫 (初入文坛)

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[求助] DEAE-52纤维素柱求助已有2人参与

现在在做食用菌子实体多糖的分离纯化，我用的是DEAE-52的纤维素柱，用0.05到0.5的NaCl 梯度洗脱，1.25ml/min，上样量是1mg/ml 的多糖10ml，每管收集5ml，过了两次，也有峰，但是纯品太少，没办法富集，还想拿到纯品，怎么办呢？

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1楼2012-06-13 10:09:29

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lezai945

新虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2012-11-16 20:30:51

多糖醇沉的时候确实有两层上面漂浮的一层是胶体状的，下面一层是沉淀。胶体状的我没做过，我做的是下面的沉淀。我有以下建议:
建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。
建议二：你上样量。可以稍稍加大点多糖的上样量。
建议三：多糖的浓度。你上样上了10ml。尽量减小上样体积，提高多糖浓度。
建议四：梯度洗脱的浓度选择。0.05-0.5这个浓度，你是随便选择的。什么浓度是最适合的，是需要实验依据的。你有两种方案选择：1、阶段性梯度洗脱：洗脱液的浓度从0、到2mol/L，选择适当的不同浓度，有低到高依次洗脱并分别收集。2、线性连续性梯度洗脱：洗脱浓度是从0-2mol/L，成线性、连续性洗脱，这种线性浓度你可以在去离子水中一边接入柱子，一边同时匀速加入高浓度的洗脱液2mol/L，同时不断搅拌（磁力搅拌器），使溶液浓度从0慢慢逐步提高。
建议四：你要对以上收集的收集液，逐管或者隔管检测多糖含量，从而来确定主峰的位置。以便选择适当的洗脱浓度，从而优化实验参数。
建议四：细心、耐心加毅力。
祝你试验成功。