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lqs075

银虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白质诱导表达 已有1人参与

本人最近在做EGFP蛋白（绿色荧光蛋白）诱导表达，载体是公司买来的pMD18-T，用的诱导剂是IPTG（终浓度为1mM），诱导时间很长，有12个小时，但是诱导前后蛋白质的表达量是一样的！为什么会这样呢？怎么样才能提高它的表达量呢？求高手指导～～～急
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1楼 2012-06-13 00:15:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-13 13:49:43
lqs075: 金币+5, ★有帮助 2012-06-17 16:15:19
如果我没理解错的话，你是用pMD18-T用来表达蛋白的吧，但是pMD18-T是克隆载体不是表达载体，你如果要表达蛋白的话需要将克隆载体上的基因片段切下来再连到表达载体上
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3楼2012-06-13 08:24:59
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-17 16:15:07
质粒的问题，进行蛋白表达要用表达载体！你需要把目的基因酶切下来构建到表达载体上才可以！
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7楼2012-06-13 17:12:35
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普通回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
你是否需要构建到表达载体
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2楼2012-06-13 08:08:51
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chlorella409

木虫 (正式写手)
pMD18-T………………
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4楼2012-06-13 09:06:12
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xiongyaoling

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-13 13:49:55
lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-17 16:15:32
你用的载体是用于克隆的，如果要表达蛋白的话，要用表达载体才对。目前用的多的原核表达载体多是PET系统，我就用这个成功表达过EGFP蛋白，表达量很高的。
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5楼2012-06-13 10:41:00
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-17 16:15:42
上面说的都很对啊，你如果要表达蛋白的话需要将克隆载体上的基因片段切下来再连到表达载体上。
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6楼2012-06-13 16:26:09
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jimjohntall

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-06-14 13:56:47
lqs075: 金币+10, ★有帮助, 谢谢你！ 2012-06-17 16:14:00
要用表达载体才行呀，而且你在哪株菌做的表达，通常好似大肠杆菌BL21（DE3）。表达载体通常用的是pet系列或者是pGEX系列，看您怎么选择了。而且诱导剂是确定表达量不高的情况下才使用的
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8楼2012-06-13 18:03:42
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-17 16:15:51
你那是克隆载体，要表达还得弄到表达载体上来的！
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9楼2012-06-13 19:17:00
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byqyli

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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lqs075: 金币+2, ★有帮助 2012-06-17 16:16:01
载体搞错了！PMD是克隆载体，果断换载体！！！
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10楼2012-06-14 11:33:30
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