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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » M-MLV反转录最大多长片段
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注定飞翔

银虫 (初入文坛)

[求助] M-MLV反转录最大多长片段

M-MLV反转录酶一般能有效反转录多长片段，我有个4K多的RNA片段能否一次反转录拿到全长CDNA
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1楼 2012-06-11 20:38:51
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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小丹木木: 金币+5, 鼓励应助 2012-06-12 13:36:04
应该是没有问题的，不知道你的酶是不是TaKaRa的，我用的M-mlv（RNase H-），可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。而且它的说明书里面有举例说明，通过转录产物分别扩增了1kb、3kb、5kb、8kb和10kb的目的DNA片段，另外它也对4.4kb的RNA进行了RT-PCR。所以说，你呢4kb多的RNA应该是没有问题的。
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2楼2012-06-11 21:35:06
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注定飞翔

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-06-11 21:35:06
应该是没有问题的，不知道你的酶是不是TaKaRa的，我用的M-mlv（RNase H-），可用于较长的cDNA合成以及高比例的全长cDNA文库的构建。而且它的说明书里面有举例说明，通过转录产物分别扩增了1kb、3kb、5kb、8kb和10kb ...

我用的是英骏的，想从dsRNA通过RT-PCR获取CDNA,不知你有没有用过这种酶呀，可行否？
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3楼2012-06-12 15:23:06
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bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
注定飞翔: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-13 19:01:18
引用回帖:
3楼: Originally posted by 注定飞翔 at 2012-06-12 15:23:06
我用的是英骏的，想从dsRNA通过RT-PCR获取CDNA,不知你有没有用过这种酶呀，可行否？...

你说呢这个我没用过，不过应该都是一样的吧，你如果是双链的话你得考虑解链，然后你的primer才能结合，这样在温度上是不是你就需要进行修改了。另外，我用的这个酶好像温度太高（70℃以上）会失活，所以你用的时候要注意primer和你的模板杂交的时候先不要加酶。。。不过还是看看你的说明书呢。。。祝实验顺利
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4楼2012-06-12 18:01:09
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