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loveskyzhou铁虫 (正式写手)
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[求助]
点突变引物设计问题，两个试剂盒两种方法啊。。。。。
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在网上和这里大多看见的引物设计是将突变的碱基放在大概30个碱基的中间，这样得到完全互补的两条引物（突变位点除外） 但在全式金的试剂盒说明书里看到如下图的设计方法，问题： 1.哪种大家比较常用？ 2.第二种是不是可以一定程度的改善引物二聚的问题？ 3.第二种方法反向引物的5'端就是突变位点，这样可以吗？如果有影响可不可以在他5'端加几个碱基以防止它暴露呢？ 求探讨  [ Last edited by loveskyzhou on 2012-6-7 at 12:44 ] |
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-06-11 13:53:17
loveskyzhou: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-11 20:38:21
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loveskyzhou: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-11 20:38:21
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1. 大家一般都用完全互补的两条引物（突变位点除外）的方法。 2. 第二种方法应该是第一种的改进，能够改善引物二聚的问题。 3. 5'端就是突变位点也没关系，因为pcr过程不涉及5‘到3’的降解。退一步说，即使加保护碱基，导入细菌后，保护碱基的降解也不是希望看到的。而且实验证明并没有被降解。 总之，实践是检验真理的唯一标准。大胆的做，才能知道行不行。个人建议按照第一种方法做。或者两个引物有几个碱基的错位就好了，以降低引物二聚体的TM值。 |
2楼2012-06-11 10:02:29
xufang7763
木虫 (正式写手)
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