| 查看: 1158 | 回复: 2 | ||
loveskyzhou铁虫 (正式写手)
|
[求助]
点突变引物设计问题，两个试剂盒两种方法啊。。。。。
|
|
在网上和这里大多看见的引物设计是将突变的碱基放在大概30个碱基的中间，这样得到完全互补的两条引物（突变位点除外） 但在全式金的试剂盒说明书里看到如下图的设计方法，问题： 1.哪种大家比较常用？ 2.第二种是不是可以一定程度的改善引物二聚的问题？ 3.第二种方法反向引物的5'端就是突变位点，这样可以吗？如果有影响可不可以在他5'端加几个碱基以防止它暴露呢？ 求探讨  [ Last edited by loveskyzhou on 2012-6-7 at 12:44 ] |
回复此楼» 本帖@通知
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有118人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 点突变引物设计的问题
已经有11人回复
- 定点突变引物设计
已经有8人回复
- 关于引物设计的问题
已经有5人回复
- 引物设计的问题
已经有13人回复
- 引物设计的问题
已经有6人回复
- 关于设计ＧＦＰ的引物设计问题。专家请入内
已经有3人回复
- 做蛋白体外表达时的引物设计问题！
已经有12人回复
- 【求助/交流】两条序列只有1-2个变异位点，能设计特异引物区别出来吗？
已经有23人回复
- 【求助/交流】定点突变引物设计问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于启动子缺失的引物设计问题
已经有4人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-06-11 13:53:17
loveskyzhou: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-11 20:38:21
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助，很热心哦 2012-06-11 13:53:17
loveskyzhou: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-06-11 20:38:21
|
1. 大家一般都用完全互补的两条引物（突变位点除外）的方法。 2. 第二种方法应该是第一种的改进，能够改善引物二聚的问题。 3. 5'端就是突变位点也没关系，因为pcr过程不涉及5‘到3’的降解。退一步说，即使加保护碱基，导入细菌后，保护碱基的降解也不是希望看到的。而且实验证明并没有被降解。 总之，实践是检验真理的唯一标准。大胆的做，才能知道行不行。个人建议按照第一种方法做。或者两个引物有几个碱基的错位就好了，以降低引物二聚体的TM值。 |
2楼2012-06-11 10:02:29
xufang7763
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3469.2
- 散金: 105
- 红花: 1
- 帖子: 310
- 在线: 309.7小时
- 虫号: 1647561
- 注册: 2012-02-27
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤诊断
3楼2013-12-11 15:36:22
30