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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间
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auau96

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间 已有2人参与

大家好  我现在在做酿酒酵母基因敲除  利用左右同源臂各390bp和540bp  因为本身菌株遗传背景不清楚  MARKER基因既不是抗性基因和也不是缺陷型基因     用能表达的酶基因做筛选标记   不知各位前辈是否有此类实验经验来敲除目的基因   
实验顺利大概需多少时间能完成
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1楼 2012-06-05 11:03:28
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
纤维素酶基因复杂。保证有活性、且能胞外表达（分泌或细胞表面展示）的前提下，可以用纤维素为唯一碳源筛选。

想在敲除一基因同时，构建纤维素利用的工程菌想法可行。但涉及到很多基础的问题。如果是这样思路的话，在验证了理论可行后，就先试试吧
个人感觉有难度。
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auau96
10楼2012-06-07 08:38:28
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)
★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 21:29:42
不知酶基因是什么，选择不好效率太差了。你可以用一些显性的遗传标记啊，比如抗G418的基因作为筛选标记。这样的话，把同源序列克隆到标记上下游，酶切一下，一次就筛选出来。
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2楼2012-06-05 13:41:30
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)
★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 21:29:36
是不是采用Cre／loxP系统？PUG6系统质粒，Ｇ４１８选择标记？
这就是同源重组原理，应该在３－６个月可以搞定，我之前有搞过这个，用的是Cre／loxP系统
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3楼2012-06-05 14:57:55
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-08-23 18:03:00
是不是采用Cre／loxP系统？PUG6系统质粒，Ｇ４１８选择标记？
这就是同源重组原理，应该在３－６个月可以搞定，我之前有搞过这个，用的是Cre／loxP系统
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4楼2012-06-05 14:58:08
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