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auau96

新虫 (小有名气)

[求助] 酿酒酵母基因敲除实验顺利需多少时间 已有2人参与

大家好  我现在在做酿酒酵母基因敲除  利用左右同源臂各390bp和540bp  因为本身菌株遗传背景不清楚  MARKER基因既不是抗性基因和也不是缺陷型基因     用能表达的酶基因做筛选标记   不知各位前辈是否有此类实验经验来敲除目的基因   
实验顺利大概需多少时间能完成
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)


rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-06-06 21:29:42
不知酶基因是什么,选择不好效率太差了。你可以用一些显性的遗传标记啊,比如抗G418的基因作为筛选标记。这样的话,把同源序列克隆到标记上下游,酶切一下,一次就筛选出来。
2楼2012-06-05 13:41:30
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iaminxanadu

木虫 (正式写手)

纤维素酶基因复杂。保证有活性、且能胞外表达(分泌或细胞表面展示)的前提下,可以用纤维素为唯一碳源筛选。

想在敲除一基因同时,构建纤维素利用的工程菌想法可行。但涉及到很多基础的问题。如果是这样思路的话,在验证了理论可行后,就先试试吧
个人感觉有难度。

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10楼2012-06-07 08:38:28
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