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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物继续扩增原来的片段效果会更好吗？
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霸_霸

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物继续扩增原来的片段效果会更好吗？ 已有13人参与

实际做出来怎么效果不怎么样啊
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1楼 2012-06-01 10:27:25
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draco1987

木虫 (正式写手)
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-04 13:38:46
你有没考虑过反应体系本身没优化造成扩增效率不高的情况？PCR产物做模板扩增效果不一定好很多，但是可以屏蔽原模板扩增产生的杂带，所以也不是一无是处。不过，想要2次重复扩增，一定要用保真度非常好的酶，不然扩增造成的碱基错配率会累积到一个很坑的水平。
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2楼2012-06-01 15:27:31
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霸_霸

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by draco1987 at 2012-06-01 15:27:31
你有没考虑过反应体系本身没优化造成扩增效率不高的情况？PCR产物做模板扩增效果不一定好很多，但是可以屏蔽原模板扩增产生的杂带，所以也不是一无是处。不过，想要2次重复扩增，一定要用保真度非常好的酶，不然扩增 ...

有道理啊
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3楼2012-06-01 15:59:45
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江苏虞游

木虫 (正式写手)
★
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我做过几次，效果还是挺不错的
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4楼2012-06-02 13:23:50
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嘘嘘巡洋舰

银虫 (初入文坛)
★
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应该会使碱基误配增加很多吧？
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5楼2012-06-02 17:02:33
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叶伟伟99

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
会啊，这样模板纯度高，但是PCR条件会有点点改变，效果会更好
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6楼2012-06-02 18:45:51
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wcwluwei

禁虫 (小有名气)
★
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本帖内容被屏蔽
7楼2012-06-02 21:24:30
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孙启亮

金虫 (著名写手)
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西瓜: 金币+2, 专家考核, 孙哥辛苦哈 2012-06-04 00:10:07
你想做二次PCR是吧，楼上已经说了要用高保真的taq，我估计如果你扩增效果不好的话你是想验证引物的质量和基因表达丰度，其实我觉得你即使没有高保真酶，也能做
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8楼2012-06-02 22:17:58
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0624410024

金虫 (正式写手)

Begging for knowledge
高保真酶，稀释模板！
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每天坚持多一点，以后困难少一点！
9楼2012-06-03 11:04:57
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syn1985

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-04 00:10:16
如果还是扩增原来的片段，那么引物不好和模板结合，这样扩增结果就会不好，所以race都是做巢式PCR的 不懂LZ为啥要PCR产物再扩增一次一样的条带呢 如果只是为了优化扩增结果，那还不如把精力放在优化PCR体系上这样效果会更好
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10楼2012-06-03 12:59:02
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