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btx362237729

金虫 (正式写手)

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[交流] 神奇的质粒提取，花儿一样神奇的单酶切跑胶！

引言：本人小硕，开始做构建，从实验组其他同学那里要来pcDNA3.1(+)做真核表达载体，一开始酶切就遇到了问题，特来请教！感谢大家指教！

下图为用同学给的pcDNA3.1(+)转化DH5α之后，手提质粒、试剂盒提质粒、3种酶单酶切试剂盒提取质粒的1%琼脂糖电泳图

M: takara的DL 10,000 Marker 1. BamHⅠ单酶切 2. HindⅢ单酶切 3. XhoⅠ单酶切
4. takara试剂盒提取的质粒 5. 碱裂解法酚氯仿抽提的质粒 6. 同学给的质粒pcDNA3.1(+)

单酶切条件为：17ul试剂盒提取的质粒+1ul酶+2ul K Buffer 共20ul体系，37℃水浴4小时

单酶切都切成花朵了，哈哈，不知道有人遇到这个问题没！！！
请教大家这到底是怎么回事？好像同学给的质粒跑胶条带也有问题，怎么两条亮带呢。。。应该不是mRNA，在冰箱放很久了。

下图是试剂盒提取的质粒和手提质粒pcDNA3.1(+)

123为试剂盒提取，456为碱裂解法酚氯仿抽提

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1楼 2012-05-31 22:36:53

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张宏宇123

金虫 (著名写手)

应助: 52 (初中生)
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★
btx362237729: 金币+1 2012-06-01 10:41:22

引用回帖:

7楼: Originally posted by btx362237729 at 2012-05-31 23:37:13
酶切浓度是什么意思？
其他实验室用的体系是17ul质粒+1ul酶+2ul buffer 切得不错所以让我也这样做。

是不是他们提的质粒浓度太低，而我的质粒浓度又太高了呢？...

你质粒切的量确实很大啊，以你提的量，我感觉你切3-5ul就够了。你切切试试。