应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 多糖酶解 HPLC 去酶
141/2返回列表12下一页
查看: 3129  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hxjhxj

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖酶解 HPLC 去酶 已有2人参与

急求！！！
我对提取的多糖进行了酶解，之后要用HPLC对水解后得到的寡糖进行分析。但是担心加入的酶试剂会影响HPLC的分析。一方面担心酶会不会堵柱子，还有一方面担心酶的峰会不会影响寡糖峰。
0.22的膜能过掉纤维素酶么？如果不能我该怎么出去这部分酶呢？它的存在会不会影响我的多糖酶解结果分析。
我考虑过sevage去蛋白，但是那样之后要进行透析，我担心透析的过程会把水解得到的寡糖去掉了。
有没有哪位前辈做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-02 20:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sweety: 金币+1, 鼓励应助,欢迎继续关注食品版 2012-05-02 22:34:33
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-05-02 21:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
无论使用示差检测器还是紫外检测器，预处理正规操作，色谱条件合理，即使出峰，影响也不大。
赞一下(1人) 回复此楼
守候在风中的宁静。
3楼2012-05-02 22:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hxjhxj at 2012-05-04 13:43:10
我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇 ...

分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？
赞一下(1人) 回复此楼
很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
5楼2012-07-18 10:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

topguntian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2012-08-13 22:29:44
建议反应后，离心10000x RPM 10 分钟来沉淀 酶。低聚糖应该没事。 还有有些柱子用有机溶剂可能不好。 不知道你什么方法测糖，我觉得酶应该对糖没什么影响。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-08-12 13:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

libocpu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶分子量多少？用量多少？0.22um肯定滤不掉，可以考虑用超滤膜。另外色谱柱如果用300A的，对于分子量几万的酶是可以耐受的。做的时候要平行做空白哦
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-05-22 10:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

楼主， 建议你用流动相先沉淀一下你的样品，

1）如果有白色悬浮物出来，就需要事先用流动相沉淀后过0.22 滤膜，然后用上清液做。

2）要是你的流动相是水溶液，你就把样品过0.22 滤膜，清液就可以直接上样用了。

我是用后者来做HPLC的。
赞一下(1人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2014-08-02 15:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liweixiaoye

至尊木虫 (著名写手)

正股级巡视员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hxjhxj(zybpxy代发): 金币+5 2014-08-17 10:23:28
你可以考虑按照以下方法解决：
1）如果你是酶解样品，pH在中性范围，可以用95摄氏度加热5min灭活，15000g离心15min或0.22微米水洗滤膜过滤进样；
2）如果你是酶解样品，pH在酸性（小于3）或碱性（大于10）范围，则不能加热，需要调节至中性再按照1）中处理；
如果单纯使用0.22微米滤膜无法将没进行有效过滤，气质可以过滤菌体或与之相似大小物质。
赞一下(1人) 回复此楼
人生短短几个秋，不醉不罢休！
12楼2014-08-08 01:02:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

hxjhxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwei10987 at 2012-05-02 21:30:14:
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。

我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇的，那我酶解后生成的低聚糖呢？能溶解于乙醇么？会不会受到影响？
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-04 13:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来 2012-08-16 21:33:08
用氯仿/异戊醇去蛋白？或者加热变性过膜去蛋白？
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-14 13:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大牛12345

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-07-18 10:18:51
分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？...

我想请教你一下，你水解多糖的方法是什么，我是这方面的初学者，望赐教
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-26 18:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你那个酶不是可以直接灭活么？？？我使用酸解的~~~
赞一下 回复此楼
很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
9楼2013-03-26 21:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxjhxj 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +15 myrtle 2026-03-10 24/1200 2026-03-15 21:16 by 苏州_逗号
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[基金申请] 国自科面上基金字体 +4 iwuli 2026-03-12 5/250 2026-03-15 17:07 by 风云无泪
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 313分生物学求调剂 +6 Yyt杨1 2026-03-09 8/400 2026-03-14 03:00 by JourneyLucky
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 328，0703考生求调剂，一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 考研材料与化工，求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:14 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 290求调剂 +3 柯淮然 2026-03-10 8/400 2026-03-11 13:48 by 柯淮然
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
[考研] 家人们 调剂不迷路 看这里 +8 likeihood 2026-03-09 13/650 2026-03-10 08:09 by likeihood
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭