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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 多糖酶解 HPLC 去酶
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hxjhxj

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖酶解 HPLC 去酶已有2人参与

急求！！！
我对提取的多糖进行了酶解，之后要用HPLC对水解后得到的寡糖进行分析。但是担心加入的酶试剂会影响HPLC的分析。一方面担心酶会不会堵柱子，还有一方面担心酶的峰会不会影响寡糖峰。
0.22的膜能过掉纤维素酶么？如果不能我该怎么出去这部分酶呢？它的存在会不会影响我的多糖酶解结果分析。
我考虑过sevage去蛋白，但是那样之后要进行透析，我担心透析的过程会把水解得到的寡糖去掉了。
有没有哪位前辈做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？
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1楼2012-05-02 20:26:33
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sweety: 金币+1, 鼓励应助,欢迎继续关注食品版 2012-05-02 22:34:33
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。
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2楼2012-05-02 21:30:14
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
无论使用示差检测器还是紫外检测器，预处理正规操作，色谱条件合理，即使出峰，影响也不大。
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守候在风中的宁静。
3楼2012-05-02 22:46:55
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hxjhxj at 2012-05-04 13:43:10
我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇 ...

分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？
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很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
5楼2012-07-18 10:18:51
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topguntian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2012-08-13 22:29:44
建议反应后，离心10000x RPM 10 分钟来沉淀 酶。低聚糖应该没事。 还有有些柱子用有机溶剂可能不好。 不知道你什么方法测糖，我觉得酶应该对糖没什么影响。
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6楼2012-08-12 13:38:50
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libocpu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶分子量多少？用量多少？0.22um肯定滤不掉，可以考虑用超滤膜。另外色谱柱如果用300A的，对于分子量几万的酶是可以耐受的。做的时候要平行做空白哦
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10楼2013-05-22 10:44:26
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

楼主， 建议你用流动相先沉淀一下你的样品，

1）如果有白色悬浮物出来，就需要事先用流动相沉淀后过0.22 滤膜，然后用上清液做。

2）要是你的流动相是水溶液，你就把样品过0.22 滤膜，清液就可以直接上样用了。

我是用后者来做HPLC的。
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2014-08-02 15:00:56
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liweixiaoye

至尊木虫 (著名写手)

正股级巡视员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hxjhxj(zybpxy代发): 金币+5 2014-08-17 10:23:28
你可以考虑按照以下方法解决：
1）如果你是酶解样品，pH在中性范围，可以用95摄氏度加热5min灭活，15000g离心15min或0.22微米水洗滤膜过滤进样；
2）如果你是酶解样品，pH在酸性（小于3）或碱性（大于10）范围，则不能加热，需要调节至中性再按照1）中处理；
如果单纯使用0.22微米滤膜无法将没进行有效过滤，气质可以过滤菌体或与之相似大小物质。
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人生短短几个秋，不醉不罢休！
12楼2014-08-08 01:02:50
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普通回帖

hxjhxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwei10987 at 2012-05-02 21:30:14:
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。

我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇的，那我酶解后生成的低聚糖呢？能溶解于乙醇么？会不会受到影响？
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4楼2012-05-04 13:43:10
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小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来 2012-08-16 21:33:08
用氯仿/异戊醇去蛋白？或者加热变性过膜去蛋白？
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7楼2012-08-14 13:35:15
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大牛12345

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-07-18 10:18:51
分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？...

我想请教你一下，你水解多糖的方法是什么，我是这方面的初学者，望赐教
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8楼2013-03-26 18:44:39
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豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你那个酶不是可以直接灭活么？？？我使用酸解的~~~
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很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
9楼2013-03-26 21:28:16
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