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hxjhxj

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖酶解 HPLC 去酶 已有2人参与

急求!!!
我对提取的多糖进行了酶解,之后要用HPLC对水解后得到的寡糖进行分析。但是担心加入的酶试剂会影响HPLC的分析。一方面担心酶会不会堵柱子,还有一方面担心酶的峰会不会影响寡糖峰。
0.22的膜能过掉纤维素酶么?如果不能我该怎么出去这部分酶呢?它的存在会不会影响我的多糖酶解结果分析。
我考虑过sevage去蛋白,但是那样之后要进行透析,我担心透析的过程会把水解得到的寡糖去掉了。
有没有哪位前辈做过多糖酶解后HPLC分析的,可以给一些意见么?
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

楼主, 建议你用流动相先沉淀一下你的样品,

1)如果有白色悬浮物出来,就需要事先用流动相沉淀后过0.22 滤膜,然后用上清液做。

2)要是你的流动相是水溶液,你就把样品过0.22 滤膜,清液就可以直接上样用了。

我是用后者来做HPLC的。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2014-08-02 15:00:56
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liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
sweety: 金币+1, 鼓励应助,欢迎继续关注食品版 2012-05-02 22:34:33
会堵柱子,酶蛋白的分子量太大,色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质,纤维素酶水溶性的,溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。
2楼2012-05-02 21:30:14
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
无论使用示差检测器还是紫外检测器,预处理正规操作,色谱条件合理,即使出峰,影响也不大。
守候在风中的宁静。
3楼2012-05-02 22:46:55
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hxjhxj

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwei10987 at 2012-05-02 21:30:14:
会堵柱子,酶蛋白的分子量太大,色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质,纤维素酶水溶性的,溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。

我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候,有些糖没有脱蛋白,进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低,所以没事?
另外,我看有些文献里面写着,加入三倍体积乙醇,再过膜,进样。多糖是不容易乙醇的,那我酶解后生成的低聚糖呢?能溶解于乙醇么?会不会受到影响?
4楼2012-05-04 13:43:10
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