应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 多糖酶解 HPLC 去酶
141/2返回列表12下一页
查看: 3158  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hxjhxj

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖酶解 HPLC 去酶 已有2人参与

急求！！！
我对提取的多糖进行了酶解，之后要用HPLC对水解后得到的寡糖进行分析。但是担心加入的酶试剂会影响HPLC的分析。一方面担心酶会不会堵柱子，还有一方面担心酶的峰会不会影响寡糖峰。
0.22的膜能过掉纤维素酶么？如果不能我该怎么出去这部分酶呢？它的存在会不会影响我的多糖酶解结果分析。
我考虑过sevage去蛋白，但是那样之后要进行透析，我担心透析的过程会把水解得到的寡糖去掉了。
有没有哪位前辈做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-02 20:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sweety: 金币+1, 鼓励应助,欢迎继续关注食品版 2012-05-02 22:34:33
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-05-02 21:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
无论使用示差检测器还是紫外检测器，预处理正规操作，色谱条件合理，即使出峰，影响也不大。
赞一下(1人) 回复此楼
守候在风中的宁静。
3楼2012-05-02 22:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hxjhxj at 2012-05-04 13:43:10
我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇 ...

分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？
赞一下(1人) 回复此楼
很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
5楼2012-07-18 10:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

topguntian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2012-08-13 22:29:44
建议反应后，离心10000x RPM 10 分钟来沉淀 酶。低聚糖应该没事。 还有有些柱子用有机溶剂可能不好。 不知道你什么方法测糖，我觉得酶应该对糖没什么影响。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-08-12 13:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

libocpu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶分子量多少？用量多少？0.22um肯定滤不掉，可以考虑用超滤膜。另外色谱柱如果用300A的，对于分子量几万的酶是可以耐受的。做的时候要平行做空白哦
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-05-22 10:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

楼主， 建议你用流动相先沉淀一下你的样品，

1）如果有白色悬浮物出来，就需要事先用流动相沉淀后过0.22 滤膜，然后用上清液做。

2）要是你的流动相是水溶液，你就把样品过0.22 滤膜，清液就可以直接上样用了。

我是用后者来做HPLC的。
赞一下(1人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2014-08-02 15:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liweixiaoye

至尊木虫 (著名写手)

正股级巡视员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hxjhxj(zybpxy代发): 金币+5 2014-08-17 10:23:28
你可以考虑按照以下方法解决：
1）如果你是酶解样品，pH在中性范围，可以用95摄氏度加热5min灭活，15000g离心15min或0.22微米水洗滤膜过滤进样；
2）如果你是酶解样品，pH在酸性（小于3）或碱性（大于10）范围，则不能加热，需要调节至中性再按照1）中处理；
如果单纯使用0.22微米滤膜无法将没进行有效过滤，气质可以过滤菌体或与之相似大小物质。
赞一下(1人) 回复此楼
人生短短几个秋，不醉不罢休！
12楼2014-08-08 01:02:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

hxjhxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwei10987 at 2012-05-02 21:30:14:
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。

我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇的，那我酶解后生成的低聚糖呢？能溶解于乙醇么？会不会受到影响？
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-04 13:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来 2012-08-16 21:33:08
用氯仿/异戊醇去蛋白？或者加热变性过膜去蛋白？
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-14 13:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大牛12345

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-07-18 10:18:51
分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？...

我想请教你一下，你水解多糖的方法是什么，我是这方面的初学者，望赐教
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-26 18:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你那个酶不是可以直接灭活么？？？我使用酸解的~~~
赞一下 回复此楼
很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
9楼2013-03-26 21:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxjhxj 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +3 暗涌afhb 2026-03-16 3/150 2026-03-20 00:28 by 河南大学校友
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 296求调剂 +3 www_q 2026-03-18 6/300 2026-03-19 22:28 by zhq0425
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 0703化学调剂，求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 0856求调剂 +3 刘梦微 2026-03-15 3/150 2026-03-16 10:00 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭