应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 碳水化合物 » 多糖酶解 HPLC 去酶
141/2返回列表12下一页
查看: 3660  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hxjhxj

新虫 (初入文坛)

[求助] 多糖酶解 HPLC 去酶 已有2人参与

急求！！！
我对提取的多糖进行了酶解，之后要用HPLC对水解后得到的寡糖进行分析。但是担心加入的酶试剂会影响HPLC的分析。一方面担心酶会不会堵柱子，还有一方面担心酶的峰会不会影响寡糖峰。
0.22的膜能过掉纤维素酶么？如果不能我该怎么出去这部分酶呢？它的存在会不会影响我的多糖酶解结果分析。
我考虑过sevage去蛋白，但是那样之后要进行透析，我担心透析的过程会把水解得到的寡糖去掉了。
有没有哪位前辈做过多糖酶解后HPLC分析的，可以给一些意见么？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-02 20:26:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuwei10987

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sweety: 金币+1, 鼓励应助,欢迎继续关注食品版 2012-05-02 22:34:33
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-05-02 21:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
无论使用示差检测器还是紫外检测器，预处理正规操作，色谱条件合理，即使出峰，影响也不大。
赞一下(1人) 回复此楼
守候在风中的宁静。
3楼2012-05-02 22:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hxjhxj at 2012-05-04 13:43:10
我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇 ...

分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？
赞一下(1人) 回复此楼
很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
5楼2012-07-18 10:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

topguntian

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

hsd3521: 应助指数+1 2012-08-13 22:29:44
建议反应后，离心10000x RPM 10 分钟来沉淀 酶。低聚糖应该没事。 还有有些柱子用有机溶剂可能不好。 不知道你什么方法测糖，我觉得酶应该对糖没什么影响。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2012-08-12 13:38:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

libocpu

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶分子量多少？用量多少？0.22um肯定滤不掉，可以考虑用超滤膜。另外色谱柱如果用300A的，对于分子量几万的酶是可以耐受的。做的时候要平行做空白哦
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2013-05-22 10:44:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

【答案】应助回帖

楼主， 建议你用流动相先沉淀一下你的样品，

1）如果有白色悬浮物出来，就需要事先用流动相沉淀后过0.22 滤膜，然后用上清液做。

2）要是你的流动相是水溶液，你就把样品过0.22 滤膜，清液就可以直接上样用了。

我是用后者来做HPLC的。
赞一下(1人) 回复此楼
【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
11楼2014-08-02 15:00:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liweixiaoye

至尊木虫 (著名写手)

正股级巡视员

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
hxjhxj(zybpxy代发): 金币+5 2014-08-17 10:23:28
你可以考虑按照以下方法解决：
1）如果你是酶解样品，pH在中性范围，可以用95摄氏度加热5min灭活，15000g离心15min或0.22微米水洗滤膜过滤进样；
2）如果你是酶解样品，pH在酸性（小于3）或碱性（大于10）范围，则不能加热，需要调节至中性再按照1）中处理；
如果单纯使用0.22微米滤膜无法将没进行有效过滤，气质可以过滤菌体或与之相似大小物质。
赞一下(1人) 回复此楼
人生短短几个秋，不醉不罢休！
12楼2014-08-08 01:02:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

hxjhxj

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by liuwei10987 at 2012-05-02 21:30:14:
会堵柱子，酶蛋白的分子量太大，色谱柱的孔径一般都300A以下。0.22um的滤膜过滤机械性杂质，纤维素酶水溶性的，溶解后能过滤膜。是不是可以考虑TLC。

我之前也怕会堵柱子 但是以前进糖样品的时候，有些糖没有脱蛋白，进样也没有关系。是不是因为糖蛋白的分子量比酶要低，所以没事？
另外，我看有些文献里面写着，加入三倍体积乙醇，再过膜，进样。多糖是不容易乙醇的，那我酶解后生成的低聚糖呢？能溶解于乙醇么？会不会受到影响？
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-04 13:43:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小毛孩24

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
hsd3521: 金币+1, 鼓励交流，欢迎常来 2012-08-16 21:33:08
用氯仿/异戊醇去蛋白？或者加热变性过膜去蛋白？
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-14 13:35:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大牛12345

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 豆豆菜虫 at 2012-07-18 10:18:51
分子量越小越易溶解于乙醇 越大越不溶  我也在做水解 可是我有些预备工作没做好 能请教你么？？？...

我想请教你一下，你水解多糖的方法是什么，我是这方面的初学者，望赐教
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-26 18:44:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

豆豆菜虫

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你那个酶不是可以直接灭活么？？？我使用酸解的~~~
赞一下 回复此楼
很多事，不是我想，就能做到的。很多东西，不是我要，就能得到的。
9楼2013-03-26 21:28:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hxjhxj 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭