24小时热门版块排行榜    

查看: 1923  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

elbo

金虫 (小有名气)

[求助] PCR问题求教

扩增细菌16S rDNA,通用引物,反应体系25ul, 用TAKARA的premix,1ul模板(含量大于40ng/ul,每孔所用模板DNA不同),1.5ul引物(10umol/L)。扩增条件,94预变性3min,94,52,72各1min,25循环,72延伸10min。1%凝胶检测如下图,最左侧为不加模板的阴性对照.最右边为Marker(第4个带为1500bp).为什么只有个别扩增出来,而且怎么有这么多的引物二聚体?退后温度低?还是模板含量太少??
请各位达人不吝赐教啊!!

1% agarose
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

D调的小E

铁杆木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, Good! 2012-05-04 18:43:45
首先建议你先检测一下模板。如果模板浓度没有问题,有可能是你引物的结合能力不是很好。还有不确定你的引物设计时是否验证过自身的配对等等。另外个人觉得你的循环数可以适当增加,同时适当减少每一步循环的时间。有些时候PCR的外界影响因素也很大。。。希望能帮的上你~~~另祝实验顺利~~~
You just need a little faith!
10楼2012-05-04 00:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 辛苦辛苦 2012-05-03 13:40:31
从图上看你所有样品都有二聚体。可能原因之一就是引物二聚体,就是引物以自己为模板把自己扩增出来了。原因之二可能是体系被污染,原因之三可能是退火温度太低。我认为前两个原因的可能性较大,建议做个NTC,同时换个无酶水
2楼2012-05-02 20:20:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

不好意思,刚看了一下,你已经做了NTC,所以最可能的原因是引物自身,引物以自己为模板把自己扩增出来了
3楼2012-05-02 20:21:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elbo

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 孙启亮 at 2012-05-02 20:20:26:
从图上看你所有样品都有二聚体。可能原因之一就是引物二聚体,就是引物以自己为模板把自己扩增出来了。原因之二可能是体系被污染,原因之三可能是退火温度太低。我认为前两个原因的可能性较大,建议做个NTC,同时 ...

那么出现 引物二聚体的原因?引物是新配置的。
4楼2012-05-03 05:52:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +3 α____ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:28 by zhq0425
[考研] 070300化学求调剂 +3 苑豆豆 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:48 by ColorlessPI
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[考研] 384求调剂 +3 子系博 2026-03-22 4/200 2026-03-22 11:04 by 搏击518
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 286分人工智能专业请求调剂愿意跨考! +4 lemonzzn 2026-03-17 8/400 2026-03-21 22:49 by lemonzzn
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 303求调剂 +5 睿08 2026-03-17 7/350 2026-03-21 03:11 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 材料专业求调剂 +6 hanamiko 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:24 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工专硕调剂 +7 heming3743 2026-03-16 7/350 2026-03-20 19:31 by zhukairuo
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
信息提示
请填处理意见