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caoxiaolei

金虫 (小有名气)

[求助] DGGE图为啥会这样

做了几次DGGE了,都是如图这样,大家帮忙分析下原因吧,我都快愁死了
条件:30%-60%的梯度,30v 30min预电泳-120v  5h, 上样:15ul样品+10ul loading buffer.
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sunmoods

金虫 (小有名气)

应该是染色问题,跑胶没什么的。
你用的什么方法染色,成像呢
2楼2012-04-24 10:05:32
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caoxiaolei

金虫 (小有名气)

我用的EB染色  染色15min
EB浓度也不大
3楼2012-04-25 08:49:33
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caoxiaolei

金虫 (小有名气)

我用的EB染色15min
4楼2012-04-25 08:49:52
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liviy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:37:44
感觉浓度范围不是太合适,可以放宽一点再试一下。
然后染色也不好,延长时间或者换EB
5楼2012-05-18 15:34:54
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-28 15:51:02
胶灌的very good, 但是问题有可能在,DNA样上面和染色上面。染色的问题不大,最主要的原因应该是你DNA样品。仔细看图,会发现有band的diffuse,说明DNA很不纯或者有一定的二聚体,能否把琼脂糖电泳图也贴出来看看。另外建议你把以后用sample:6*loading buffer为9:1左右.
先把清洗的DNA的band做出来,再去探求最佳电压和涌动条件
一路蚯蚓
6楼2012-05-28 09:45:29
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

接楼上。
没说全,你做的是细菌还是真菌,还是?
哪个区的,还有一个可能是不是你没用GC夹?
一路蚯蚓
7楼2012-05-28 09:52:34
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翰章

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这DNA的浓度可能较低,你回收产物最好是40uL左右吧,15uL应该是不会很多的,所以建议你弄100uLPCR产物回收。
好像你的变性梯度不是很合适,用35%-55%试试。
8楼2012-05-28 17:30:30
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