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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE图为啥会这样
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caoxiaolei

金虫 (小有名气)

[求助] DGGE图为啥会这样

做了几次DGGE了，都是如图这样，大家帮忙分析下原因吧，我都快愁死了
条件：30%-60%的梯度，30v 30min预电泳-120v  5h， 上样：15ul样品+10ul loading buffer.
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1楼 2012-04-24 10:02:53
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sunmoods

金虫 (小有名气)
应该是染色问题，跑胶没什么的。
你用的什么方法染色，成像呢
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2楼2012-04-24 10:05:32
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caoxiaolei

金虫 (小有名气)
我用的EB染色  染色15min
EB浓度也不大
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3楼2012-04-25 08:49:33
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caoxiaolei

金虫 (小有名气)
我用的EB染色15min
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4楼2012-04-25 08:49:52
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liviy

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-18 15:37:44
感觉浓度范围不是太合适，可以放宽一点再试一下。
然后染色也不好，延长时间或者换EB
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5楼2012-05-18 15:34:54
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-05-28 15:51:02
胶灌的very good， 但是问题有可能在，DNA样上面和染色上面。染色的问题不大，最主要的原因应该是你DNA样品。仔细看图，会发现有band的diffuse，说明DNA很不纯或者有一定的二聚体，能否把琼脂糖电泳图也贴出来看看。另外建议你把以后用sample：6*loading buffer为9:1左右.
先把清洗的DNA的band做出来，再去探求最佳电压和涌动条件
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一路蚯蚓
6楼2012-05-28 09:45:29
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huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

接楼上。
没说全，你做的是细菌还是真菌，还是？
哪个区的，还有一个可能是不是你没用GC夹？
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一路蚯蚓
7楼2012-05-28 09:52:34
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翰章

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你这DNA的浓度可能较低，你回收产物最好是40uL左右吧，15uL应该是不会很多的，所以建议你弄100uLPCR产物回收。
好像你的变性梯度不是很合适，用35%-55%试试。
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8楼2012-05-28 17:30:30
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