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[求助]
DGGE,跑出好的图的师兄师姐传授下经验啊
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本人用DGGE分析食品在贮藏过程中菌相变化，跑了两个多月了，一张好的图都没有，实在不知怎么办啊，pcR产物经凝胶电泳检测结果很好。DGGE有些图细小的条带跑不出来，有些图有雪花，有些条带弯曲，可每次操作都挺规范的啊，请高手指点啊！ [ Last edited by 张华www on 2011-5-31 at 10:49 ] |
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jayzhao520
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caisanrenju
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caisanrenju
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【答案】应助回帖
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树树8013(金币+1, 食品EPI+1): 板块欢迎你常来讨论交流。 2011-06-01 22:55:23
张华www(金币+5): 很有帮助，可惜我金币少，要不一定多给，十分感谢啊 2011-06-02 08:28:02
sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:46:45
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sweety: 回帖置顶 2011-12-30 09:46:45
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我做的时候，EB染色5min，脱色15min，配EB染液和洗脱液最好用你的电泳缓冲液。按照你的染色脱色条件，如果我没猜错的话，背景应该很亮吧？染30min我觉得没必要，时间太久了。脱洗一次就够，多放点液体，可以保证你的胶完整。 有关你条带集中在中间，个人觉得有几个可能的原因： 1。PCR偏好严重，条带相似度较高，导致集中在一个区域 2。40%-55%的变性范围不合适，可尝试下再缩小变性的范围，比如45-55 3。灌胶失误，胶的变性梯度不均匀 最后，我觉得LZ应该了解，如果一个条带在DGGE胶中变性了，你再电泳，这个条带也是几乎不动的。这涉及到DGGE分离的原理，所以你后来帖子中的尝试是没有意义的。 |
9楼2011-06-01 20:30:19
10楼2011-06-02 08:25:23
