24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3066  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

castlered

木虫 (小有名气)

[求助] 问问pet-28a克隆构建引物的问题

如果设计带C端his的引物,是不是下游只能用NCoI这个酶切位点啊,XbaI和NcoI之间的RBS对C端his表达有影响么,需要保留它么?
附pet-28a图谱
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxmouse84

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
amisking: 金币+3, 鼓励帮助解答,欢迎继续交流。 2012-04-17 19:49:30
看了这么多回复,感觉都没说全啊。pET28a上面两个His tag,第一个当然是表达N端带his用的,第二个是用来表达C端带his用的。你想表达C端带his的,怎么能扯到rbs序列那里。要是N端不想要多余的东西,直接用上游NcoI加下游XhoI好了,别忘了给你要表达的片段加上ATG起始密码子,要是全长,就不用在N端加ATG,但是末尾要去掉终止密码子。
8楼2012-04-17 14:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
castlered: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-17 13:36:39
rbs序列不要去除,可以设计引物时加上其他的酶切位点紧连上his序列即可,注意加上保护碱基,另外要注意碱基数量,别导致发生移码,以至于没法表达His
2楼2012-04-17 10:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

castlered

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 太极拳 at 2012-04-17 10:28:26:
rbs序列不要去除,可以设计引物时加上其他的酶切位点紧连上his序列即可,注意加上保护碱基,另外要注意碱基数量,别导致发生移码,以至于没法表达His

如果是N端his肯定要保留rbs,C端也要么?C端不是从C端开始表达的么,rbs都在终止密码子后面,有意义么?
3楼2012-04-17 10:52:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流。 2012-04-17 19:49:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by castlered at 2012-04-17 10:52:58:
如果是N端his肯定要保留rbs,C端也要么?C端不是从C端开始表达的么,rbs都在终止密码子后面,有意义么?

不对,RBS(核糖体附着位点)是紧跟启动子和操纵子的,在起始密码子ATG之前,怎么会跑到终止密码子后面呢?看质粒图谱方向反了吧。
Thank-you,so-blue.
4楼2012-04-17 11:15:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 复试调剂 +14 呼呼?~+123456 2026-04-05 14/700 2026-04-06 22:50 by chenzhimin
[考研] 一志愿南科大生物学297分,求调剂推荐 +6 Y-yyusx 2026-04-06 7/350 2026-04-06 22:39 by 52305043001
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 312求调剂 +13 gtw1 2026-04-06 15/750 2026-04-06 20:25 by lijunpoly
[考研] 生物与医药求调剂 +7 heguanhua 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:41 by macy2011
[考研] 22408 331分求调剂 +4 y__1 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:26 by 土木硕士招生
[考研] 085405软件工程301分求调剂,专硕可跨专业,四六级已过 +3 静静想想 2026-04-05 3/150 2026-04-06 15:23 by nepu_uu
[考研] 0817化学工程与技术求调剂,一志愿中海洋319 +14 lv945 2026-04-04 14/700 2026-04-06 10:20 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿郑大0705求调剂 +3 橘十一 2026-04-02 4/200 2026-04-05 00:05 by chongya
[考研] 363求调剂 +7 zh096 2026-04-04 7/350 2026-04-04 17:13 by dongzh2009
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:46 by 欣喜777
[考研] 282求调剂 +5 呼吸都是减肥 2026-03-31 5/250 2026-04-03 12:03 by 1753564080
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-04-02 9/450 2026-04-03 11:12 by wanwan00
[考研] 325分化学调剂 +5 15771691647 2026-04-02 5/250 2026-04-03 09:58 by ChemPharm
[考研] 312求调剂 +4 赊月色 2026-04-02 5/250 2026-04-03 08:21 by fangshan711
[考研] 学硕化学工程与技术,一志愿中国海洋大学320+求调剂 +8 披星河 2026-04-02 8/400 2026-04-02 14:12 by oooqiao
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 生物与医药考研调剂 +5 铁憨憨123425 2026-03-31 5/250 2026-04-01 18:01 by syh9288
[硕博家园] 博一被送出联培感觉不适应怎么办 +3 全村的狗 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:44 by 328838485
[考研] 0855机械初试280求调剂 +3 kazenotori 2026-03-31 3/150 2026-04-01 10:08 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见