应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 问问pet-28a克隆构建引物的问题
51/1返回列表
查看: 3009  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

castlered

木虫 (小有名气)

[求助] 问问pet-28a克隆构建引物的问题

如果设计带C端his的引物，是不是下游只能用NCoI这个酶切位点啊，XbaI和NcoI之间的RBS对C端his表达有影响么，需要保留它么？
附pet-28a图谱
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-17 09:21:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

castlered

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by susizheng at 2012-04-17 11:15:06:
不对，RBS（核糖体附着位点）是紧跟启动子和操纵子的，在起始密码子ATG之前，怎么会跑到终止密码子后面呢？看质粒图谱方向反了吧。

pet-28a质粒不是可以构建N端his和C端his么？N端当然是正常的了，rbs在2启动子之后，ATG之前。但是用C端his呢？
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-17 11:18:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

太极拳

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
castlered: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-17 13:36:39
rbs序列不要去除，可以设计引物时加上其他的酶切位点紧连上his序列即可，注意加上保护碱基，另外要注意碱基数量，别导致发生移码，以至于没法表达His
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-17 10:28:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

castlered

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 太极拳 at 2012-04-17 10:28:26:
rbs序列不要去除，可以设计引物时加上其他的酶切位点紧连上his序列即可，注意加上保护碱基，另外要注意碱基数量，别导致发生移码，以至于没法表达His

如果是N端his肯定要保留rbs，C端也要么？C端不是从C端开始表达的么，rbs都在终止密码子后面，有意义么？
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-17 10:52:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流。 2012-04-17 19:49:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by castlered at 2012-04-17 10:52:58:
如果是N端his肯定要保留rbs，C端也要么？C端不是从C端开始表达的么，rbs都在终止密码子后面，有意义么？

不对，RBS（核糖体附着位点）是紧跟启动子和操纵子的，在起始密码子ATG之前，怎么会跑到终止密码子后面呢？看质粒图谱方向反了吧。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
4楼2012-04-17 11:15:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭！
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 6/300 2026-03-16 19:38 by z1z2z3879
[文学芳草园] 伙伴们，祝我生日快乐吧 +17 myrtle 2026-03-10 26/1300 2026-03-16 18:32 by 青橙Ln
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +5 ly3471z 2026-03-13 5/250 2026-03-16 16:16 by 哦哦123
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +6 步川酷紫123 2026-03-13 6/300 2026-03-13 21:59 by 星空星月
[考研] 285化工学硕求调剂（081700） +6 柴郡猫_ 2026-03-12 6/300 2026-03-13 20:46 by hmn_wj
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭