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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 关于酵母抗zeocin时间问题
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lyani

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于酵母抗zeocin时间问题

GS115本身是没有zeocin抗性的。
但是为了确保万无一失，我将GS115挑单菌落，30°C 摇16h，菌液在OD600为0.3左右，涂200ul于 YPD+zeocin（博来霉素终浓度为100ug/ml）上，30°C避光培养，但是72个小时就长了很小的菌落。是zeocin失效了，还是什么其他问题？还是我在涂板的时候就应该避光操作？
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1楼2012-04-16 10:25:42
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一休陈

金虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by 墨香若水 at 2012-04-16 10:32:33
涂板没必要避光操作，我以前都是用25-50ug/ml  可能菌体太浓的原因吧 也可能Z失效   直接挑单菌落画板看会不会长~

请问你以前是用博来霉素筛选酿酒酵母阳性克隆吗？博来霉素母液保存也是要低温冻存避光保存对吧？一般博来霉素多酿酒酵母阳性克隆的筛选工作浓度为25-50ug/ml?
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7楼2014-02-21 11:04:06
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一休陈

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6楼: Originally posted by reallpf at 2012-09-09 19:57:27
关于Zeocin抗性的使用，一般大肠是100mL培养基加25uL就足够，但是要是LLB，不能使用LB，高盐浓度会降低Zeocin效率。
对于酵母，100mL培养基加40-50uL足矣。
而且Zeocin抗性的筛选效率一般比较低，长得菌落数会少， ...

请问你的博来霉素的母液浓度是100mg/mL吗？
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8楼2014-02-21 14:26:47
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