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lyani

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1250942

[交流] 关于酵母抗zeocin时间问题

GS115本身是没有zeocin抗性的。
但是为了确保万无一失，我将GS115挑单菌落，30°C 摇16h，菌液在OD600为0.3左右，涂200ul于 YPD+zeocin（博来霉素终浓度为100ug/ml）上，30°C避光培养，但是72个小时就长了很小的菌落。是zeocin失效了，还是什么其他问题？还是我在涂板的时候就应该避光操作？

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1楼 2012-04-16 10:25:42

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reallpf

木虫 (正式写手)

BioEPI: 1
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虫号: 1892494

★
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关于Zeocin抗性的使用，一般大肠是100mL培养基加25uL就足够，但是要是LLB，不能使用LB，高盐浓度会降低Zeocin效率。
对于酵母，100mL培养基加40-50uL足矣。
而且Zeocin抗性的筛选效率一般比较低，长得菌落数会少，所以要适当增加转化用的质粒浓度和DNA量，特别是转化酵母。

关于倒Zeocin抗性平板，倒板后吹板时机的避光，培养记得避光。涂板时是不用避光的。

而Zeocin抗性72h肯定还有筛选效率的，不会失效。所以可能是你的Zeocin本来效率就不好，或者GS115污染。

另外倒板加Zeocin抗性的时候，温度非常重要，最好的是手心不烫，手背烫（大约45-50度）。温度高了，抗性会失效的。