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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于DNA胶回收和酶切后回收的问题，诚请指导
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小山店

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于DNA胶回收和酶切后回收的问题，诚请指导

最近做胶回收产率很低，也找不到原因。
用的是omega试剂盒。

说明书上说的是常温吸附且没有要求加入异丙醇，而我每次习惯性的在冰上冷却，然后加入终浓度为20%的异丙醇。不知道这两个因素会不会影响产率。

多谢大家指点指点哈，小弟刚出道，还请大家多关照。
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1楼 2012-04-15 11:39:10
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ZMJ_jeremy

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
说明书写的应该很详尽。。好好按说明书的做一次
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2楼2012-04-15 11:52:28
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答，欢迎继续交流。 2012-04-15 18:41:42
完全按照说明书上做一次，不要有任何改动，既然人家的说明书是那么写的，那么肯定是有道理的，要不这么大的公司出现按说明书做不出来的情况还咋混呀

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好孩子！
3楼2012-04-15 11:57:53
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小山店

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ZMJ_jeremy at 2012-04-15 11:52:28:
说明书写的应该很详尽。。好好按说明书的做一次

嗯，好的，谢谢。
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4楼2012-04-18 10:43:58
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小山店

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhang8826857 at 2012-04-15 11:57:53:
完全按照说明书上做一次，不要有任何改动，既然人家的说明书是那么写的，那么肯定是有道理的，要不这么大的公司出现按说明书做不出来的情况还咋混呀

嗯，谢谢你，我会的。
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5楼2012-04-18 10:44:19
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chibang1220

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切胶时尽可能的别切多余的胶，该精致的一定要多静置一会，别怕慢
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人的差别在于业余时间
6楼2012-04-18 10:50:35
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-18 18:09:52
第一步切胶要彻底，第二步溶胶也要彻底，最后洗脱的时候也要注意，尽量将洗脱液加到膜的中央，并放置数分钟再离心，前提是跑胶时你的条带也很亮
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7楼2012-04-18 14:26:39
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YZQ_XM

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流，欢迎常来！ 2012-04-18 18:10:05
可以先完全按照说明书走一遍，做个对照，看看结果如何，如果还是不行，那就是其他地方的问题。胶跑的亮不亮，切胶时是否切得太大（胶太大对溶胶这步影响挺大的），最后一步洗脱时要把洗脱液加到膜中心，不然DNA没洗下去，自然就回收率低了。
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8楼2012-04-18 15:10:13
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caoluoyuan

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

回收柱可以重复洗1-2次，加热洗脱液也可以增加回收率。
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9楼2012-05-31 21:12:53
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

首先肯定ls几位的说法：要尊重说明书的步骤；
其次指出你的错误：凡是胶回收（吸附法的，比如过柱子）的kit，除了开始溶胶可能温度略高，所有剩余步骤都是室温进行的，你预冷之后，对柱子上的吸附膜影响很大；
异丙醇对回收的影响仅限于小片段DNA,即当小于100还是200bp？--记不清了，必须加；一般不会有负面影响，应该不是这个的原因
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10楼2012-06-01 09:04:29
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