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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有关质粒转化结果
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chenxueqiao

木虫 (正式写手)

[求助] 有关质粒转化结果

质粒转化的实验中阴性对照没长菌，但是转化平板上过夜培养后没长菌，更长时间才长，这是为什么？
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O(∩_∩)O哈哈~
1楼 2012-04-12 22:50:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 斑斑辛苦 2012-04-13 14:11:37
chenxueqiao: 金币+5, ★有帮助 2012-04-13 19:40:29
你这转化基本废了……
这种情况，长时间后长起来的是不带质粒的杂菌。抗生素的活性只能维持一段时间，常见的氨苄青霉素（Amp）在37℃大约能维持16小时（也就是过夜），时间太长后就失效了。一般抗生素只能抑制杂菌生长，并不能杀死它们，所以抗生素失效之后，杂菌就能长起来了。
以后做转化，过夜之后没长起来，果断重做吧，祝顺利
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2楼2012-04-12 23:56:57
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普通回帖

chenxueqiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-12 23:56:57:
你这转化基本废了……
这种情况，长时间后长起来的是不带质粒的杂菌。抗生素的活性只能维持一段时间，常见的氨苄青霉素（Amp）在37℃大约能维持16小时（也就是过夜），时间太长后就失效了。一般抗生素只能抑制杂 ...

但是阴性平板上没长菌。如果氨苄失效的话，是不是阴性平板上也应该长菌啊？
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O(∩_∩)O哈哈~
3楼2012-04-13 08:10:36
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenxueqiao at 2012-04-13 08:10:36:
但是阴性平板上没长菌。如果氨苄失效的话，是不是阴性平板上也应该长菌啊？

你阴性对照是什么做的？
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4楼2012-04-13 19:49:58
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chenxueqiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-13 19:49:58:
你阴性对照是什么做的？

是在含氨苄的平板上接没转质粒的菌
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西瓜
O(∩_∩)O哈哈~
5楼2012-04-14 08:24:13
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bonbonzd

木虫 (小有名气)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-16 00:54:11
楼主的宿主菌是大肠还是其他，如果是大肠，那就去楼上大家所言那样，是杂菌。若不是大肠，可能是因为质粒上的抗性基因在你的宿主菌内需要较长时间才表达，比如农杆菌作为宿主转化后，在抗性板子上一般要两天才长出阳性菌落。
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6楼2012-04-15 00:13:55
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chenxueqiao

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bonbonzd at 2012-04-15 00:13:55:
楼主的宿主菌是大肠还是其他，如果是大肠，那就去楼上大家所言那样，是杂菌。若不是大肠，可能是因为质粒上的抗性基因在你的宿主菌内需要较长时间才表达，比如农杆菌作为宿主转化后，在抗性板子上一般要两天才长出 ...

是大肠，应该是杂菌了
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O(∩_∩)O哈哈~
7楼2012-04-15 08:29:41
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diy患者

铁虫 (正式写手)
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 2012-04-16 00:55:21
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-12 23:56:57:
你这转化基本废了……
这种情况，长时间后长起来的是不带质粒的杂菌。抗生素的活性只能维持一段时间，常见的氨苄青霉素（Amp）在37℃大约能维持16小时（也就是过夜），时间太长后就失效了。一般抗生素只能抑制杂 ...

不同意这个观点。amp没有这么脆弱。我估计正常阴性对照37度放上三四天是不会长大肠的。

当然，我一般用的浓度是上限100的浓度。
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8楼2012-04-15 21:34:39
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diy患者

铁虫 (正式写手)
1.先确定是不是大肠，如果是，那说明可能你的amp浓度太低了。
2.不是大肠，说明污染了，有些杂菌天生抗amp
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9楼2012-04-15 21:35:53
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
送鲜花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by chenxueqiao at 2012-04-14 08:24:13:
是在含氨苄的平板上接没转质粒的菌

不好意思，之前不知怎么没看到……可能是阴性对照放久了，抗生素失效，没转化的菌也能长起来了。
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10楼2012-04-16 00:53:59
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