应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 综合其他 » 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低
51/1返回列表
查看: 4277  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

龙开聪

金虫 (小有名气)

[交流] 十万火急，重组质粒酶切只有一条带，测序有结果，但反复说我质粒浓度很低

我使用的载体是Pet-32a（+），宿主菌是BL21(DE3)，连接上目的基因后，提取重组质粒进行双酶切，30微升体系，酶切能看到两个条带，但目的基因被切下的条带很淡很淡，送出去测序，结果正确，但发送的报告反复说我质粒浓度很低，我进行表达后，确实表达量很不理想，用改目的基因连接到pcDNA3.1(+)上后，转化JM109，重新提取质粒，酶切使用了30微升体系，只看到载体的条带，使用了60微升体系后，目的基因的条带任然非常淡，近乎看不见，送重组菌出去测序，正反两个方向测序，却只有正一个方向有结果，表明我目的基因是连接上去了，但另一个方向测序却无结果，报告说质粒浓度太低，目的基因片段1100，测序公司为北京诺赛。求高手指点迷津，为何我质粒浓度这么低，导致酶切看不见双条带，原核表达量极低？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-04-10 08:20:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqwang8706

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主你再做个平板塞选吧~！还是氨苄平板 挑单个菌落再弄一下！
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-11 20:34:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
lz诱导表达的条件可以考虑修改一下~

葡萄糖是不是会一直pet系列载体的表达呢？
赞一下 回复此楼
2楼2012-04-10 08:43:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙开聪

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaohq1209 at 2012-04-10 08:43:23:
lz诱导表达的条件可以考虑修改一下~

葡萄糖是不是会一直pet系列载体的表达呢？

我用50ml诱导表达 没有目的条带，没办法，加到500ML才看到目的条带，体积太大，我不好优化，关键我觉得可能是我质粒浓度低，所以表达量极低，不知如何解决啊
赞一下 回复此楼
3楼2012-04-10 08:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

龙开聪

金虫 (小有名气)
我想在LB平板上加葡萄糖试试，但不知道LB平板是不是只加葡萄糖，那加不加氨苄呢，还是一起加？
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-10 08:57:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭