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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot的小问题
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autumnfang

金虫 (初入文坛)

[交流] 关于western blot的小问题

刚开始做western blot ，每次做都是不出结果，我的目的蛋白分子量58kd。
主要问题有1、跑胶之后marker中红色的那一条下面只有两条蓝色的带
                  2、曝光之后胶片没有任何东西。
[/img][/img]
我在想是不是我电转的时间过长，将蛋白转没了
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1楼 2012-04-03 16:11:19
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2011加油

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-04-04 13:03:00
做WB问题的出处有太多环节。电泳、电转、一抗/二抗孵育、曝光时间长短、显影液等。你是进行ECL发光吗？首先你先确认发光时看到荧光没有？如果没有，问题极有可能存在于之前的环节。如蛋白的上样量，电泳液的PH，电转的时间，PVDF膜的前处理（最好后面不晾干），一抗、二抗连接的类型是否匹配。现在刚开始尝试做WB，建议你:首先做两块胶，一块用于考染，脱色后若有条带，则另一块用于摸索电转的条件。保证一步步没问题。
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6楼2012-04-03 21:28:46
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
操作上是否有问？
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2楼2012-04-03 16:41:22
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autumnfang

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2012-04-03 16:41:22:
操作上是否有问？

我注意操作了 只是实验过程中pvdf膜稍微有些干
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-04-03 17:22:07
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超然渡陈

金虫 (小有名气)
★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
你转膜的时候用的电压和电流分别是多少？转膜多长时间？建议你转膜之后用考马斯蓝染液对胶进行染色，膜上没有蛋白的话要看一下蛋白是否残留在胶上。
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4楼2012-04-03 20:17:43
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