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autumnfang

金虫 (初入文坛)


[交流] 关于western blot的小问题

刚开始做western blot ,每次做都是不出结果,我的目的蛋白分子量58kd。
主要问题有1、跑胶之后marker中红色的那一条下面只有两条蓝色的带
                  2、曝光之后胶片没有任何东西。
[/img][/img]
我在想是不是我电转的时间过长,将蛋白转没了
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autumnfang

金虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2012-04-03 16:41:22:
操作上是否有问?

我注意操作了 只是实验过程中pvdf膜稍微有些干
3楼2012-04-03 17:22:07
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查看全部 13 个回答

userhung

禁虫 (文学泰斗)



autumnfang(金币+1): 谢谢参与
操作上是否有问?
2楼2012-04-03 16:41:22
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超然渡陈

金虫 (小有名气)



autumnfang(金币+1): 谢谢参与
你转膜的时候用的电压和电流分别是多少?转膜多长时间?建议你转膜之后用考马斯蓝染液对胶进行染色,膜上没有蛋白的话要看一下蛋白是否残留在胶上。
4楼2012-04-03 20:17:43
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308630949

银虫 (小有名气)



autumnfang(金币+1): 谢谢参与
你可以用染色胶,也可以用丽春红染色pvdf膜,丽春红可逆,可以冲洗后继续下面的工作,效果可能不是太好就是,染色膜的话背景最后有点深
5楼2012-04-03 21:23:39
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