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关于western blot的小问题
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autumnfang
金虫
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(幼儿园)
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帖子: 39
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虫号: 989292
[交流]
关于western blot的小问题
刚开始做western blot ,每次做都是不出结果,我的目的蛋白分子量58kd。
主要问题有1、跑胶之后marker中红色的那一条下面只有两条蓝色的带
2、曝光之后胶片没有任何东西。
[/img]
[/img]
我在想是不是我电转的时间过长,将蛋白转没了
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2012-04-03 16:11:19
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虫儿小
铜虫
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★ ★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励交流
2012-04-06 17:40:14
中间过程太多了,哪一步出了问题都会导致结果不好,我刚开始做的时候也是,练得时间长了,方法也没怎么变就能有结果了。胶片不显,发光时能不能看到膜上有亮的条带呢?发光液和显影液有没有问题吗?抗体有没有坏啊?这些都没问题就是膜上没转上蛋白,可以看看前面虫友给的建议
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11楼
2012-04-06 14:25:46
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userhung
禁虫
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★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
操作上是否有问?
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2楼
2012-04-03 16:41:22
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autumnfang
金虫
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(幼儿园)
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虫号: 989292
引用回帖:
2楼
:
Originally posted by
userhung
at 2012-04-03 16:41:22:
操作上是否有问?
我注意操作了 只是实验过程中pvdf膜稍微有些干
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3楼
2012-04-03 17:22:07
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超然渡陈
金虫
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★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
你转膜的时候用的电压和电流分别是多少?转膜多长时间?建议你转膜之后用考马斯蓝染液对胶进行染色,膜上没有蛋白的话要看一下蛋白是否残留在胶上。
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4楼
2012-04-03 20:17:43
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