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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于western blot的小问题
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autumnfang

金虫 (初入文坛)

[交流] 关于western blot的小问题

刚开始做western blot ，每次做都是不出结果，我的目的蛋白分子量58kd。
主要问题有1、跑胶之后marker中红色的那一条下面只有两条蓝色的带
                  2、曝光之后胶片没有任何东西。
[/img][/img]
我在想是不是我电转的时间过长，将蛋白转没了
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1楼2012-04-03 16:11:19
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虫儿小

铜虫 (小有名气)
★ ★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-06 17:40:14
中间过程太多了，哪一步出了问题都会导致结果不好，我刚开始做的时候也是，练得时间长了，方法也没怎么变就能有结果了。胶片不显，发光时能不能看到膜上有亮的条带呢？发光液和显影液有没有问题吗？抗体有没有坏啊？这些都没问题就是膜上没转上蛋白，可以看看前面虫友给的建议
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11楼2012-04-06 14:25:46
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userhung

禁虫 (文学泰斗)
★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
操作上是否有问？
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2楼2012-04-03 16:41:22
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autumnfang

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by userhung at 2012-04-03 16:41:22:
操作上是否有问？

我注意操作了 只是实验过程中pvdf膜稍微有些干
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3楼2012-04-03 17:22:07
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超然渡陈

金虫 (小有名气)
★
autumnfang(金币+1): 谢谢参与
你转膜的时候用的电压和电流分别是多少？转膜多长时间？建议你转膜之后用考马斯蓝染液对胶进行染色，膜上没有蛋白的话要看一下蛋白是否残留在胶上。
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4楼2012-04-03 20:17:43
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