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atai5793

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS-PAGE胶的问题

目的蛋白在第四条Maker的以下，但现在四条Maker以下条带都没有跑出，感觉是一趟下来的，没有跑开，怎么回事，求帮助

凝胶图

[ Last edited by atai5793 on 2012-4-2 at 10:20 ]
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1楼2012-04-02 09:55:06
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励帮助解答问题！ 2012-04-02 20:01:20
你的胶图有以下几个问题：
1：胶做的有问题，Tris-HClbuffer的pH不准，AP失效了，配胶比例不正确都可能导致胶质量很差，Marker跑的也很烂。
2：样品上样量太高了，少点些样品就可以分清带了。
3：染色液该换了。
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生活是面镜子~
2楼2012-04-02 15:25:49
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atai5793

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by to-be at 2012-04-02 15:25:49:
你的胶图有以下几个问题：
1：胶做的有问题，Tris-HClbuffer的pH不准，AP失效了，配胶比例不正确都可能导致胶质量很差，Marker跑的也很烂。
2：样品上样量太高了，少点些样品就可以分清带了。
3：染色液该换了。

tris 是我才配的PH也是刚调的 我的Maker可以哈，上样我才加了10ul 上边的还凑合就是下边的不清楚 你没搞到重点 还是谢谢
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3楼2012-04-02 15:34:48
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to-be

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atai5793 at 2012-04-02 15:34:48:
tris 是我才配的PH也是刚调的 我的Maker可以哈，上样我才加了10ul 上边的还凑合就是下边的不清楚 你没搞到重点 还是谢谢

你的10uL这么浓，上3-4uL就可以看清带了
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生活是面镜子~
4楼2012-04-02 15:37:58
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看样子是楼主的样品没处理好吧
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jiayoubashaonian
5楼2012-04-02 16:17:08
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atai5793

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-04-02 16:17:08:
看样子是楼主的样品没处理好吧

在考虑再做一批试试
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6楼2012-04-02 16:35:16
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chenhuize

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-03 15:08:32
样品的制备可能有问题。
染色时间没控制好。
跑胶电压与电流是否合适？
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7楼2012-04-02 21:50:02
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+4, Good! 2012-04-03 15:10:13
我们这边跑胶之后染色，跟这差不多，只不过诱导之后目的蛋白表达非常高，条带就非常清楚。其他你说的那些第四条Maker以下条带都没有跑出，感觉是一趟下来的，没有跑开。我仔细看了一下，第四条Maker下边都有一条稍微浓一些的带，几个样也差不多在同一个位置，不知道是不是你目的蛋白条带。那些你说的一趟下来的是杂蛋白，因为你是直接拿全蛋白跑的而没有经过分离纯化，肯定会有杂蛋白条带，也并不是没有跑开。在自己目的蛋白条带很浓的情况下可以脱色久一点，这样条带会分的清楚一点。
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8楼2012-04-03 10:31:49
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阿尔fo

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主你好，看了你的电泳图感觉是可能是样品出了问题，因为maker跑的很好，所以胶和电压应该没有问题，1，检查一下上样缓冲液2，可能如其他人所说，杂蛋白太多，预先进行一下分离纯化，如果目的蛋白损失很多，是不是再考虑适当浓缩。本人小本一名，以上意见只是我的个人推断，自己还没有过这种情况，最近也在跑，祝你好运！
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9楼2012-04-03 17:12:58
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wanglei512

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2012-04-03 10:31:49:
我们这边跑胶之后染色，跟这差不多，只不过诱导之后目的蛋白表达非常高，条带就非常清楚。其他你说的那些第四条Maker以下条带都没有跑出，感觉是一趟下来的，没有跑开。我仔细看了一下，第四条Maker下边都有一条稍 ...

没有破碎好，所以拖带。如果破碎好，上样量大一点也没事
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10楼2012-04-03 17:14:05
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