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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 今天做PCR，空白组竟然也跑出条带（还都是两条），大家帮忙找下原因
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waldenpond

金虫 (著名写手)

[求助] 今天做PCR，空白组竟然也跑出条带（还都是两条），大家帮忙找下原因

今天做PCR，空白组竟然也跑出条带（还都是两条），大家帮忙找下原因
因为图片不能拷，我就用画图做了个示意图，大家将就看一下，帮我找下原因吧。
谢谢！
*Marker 样本1 DNA和dd水（没有加DNA模板，作为空白组）
*不管样本1还是空白组都跑出了条带，而且是两条。
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1楼 2012-03-31 18:31:01
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回帖置顶 ( 共有1个 )

waldenpond

金虫 (著名写手)
西瓜: 回帖置顶 2012-04-02 11:17:54
引用回帖:
11楼: Originally posted by hejp03 at 2012-04-01 15:50:33:
很明显是出现了污染。
楼主操作应该注意下。
另外，把用的枪头，EP管等都进行灭菌处理。

应该是。今天我换了试剂，换了条件跑了一下。结果还可以。杂带没有了。
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12楼2012-04-01 23:08:08
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普通回帖

bbwalkman

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+5, ★有帮助 2012-03-31 21:48:28
西瓜: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-02 11:15:39
你的这个图的方向是什么样的啊，Maker用的多大的啊，样品带中有你要的目的条带么？
1.如果样品中没有你要的条带，那可能是你引物设计的不合理，有非特异性扩增
2.也有可能是你水不达标吧，换一下试试呢
3.还有可能就是你在空白里面也不小心加了样品DNA了
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2楼2012-03-31 19:37:54
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waldenpond

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbwalkman at 2012-03-31 19:37:54:
你的这个图的方向是什么样的啊，Maker用的多大的啊，样品带中有你要的目的条带么？
1.如果样品中没有你要的条带，那可能是你引物设计的不合理，有非特异性扩增
2.也有可能是你水不达标吧，换一下试试呢
3.还有 ...

图的上方是加样孔。
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3楼2012-03-31 21:48:01
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢各位专家虫友！我再去排查一遍。 2012-04-01 11:19:45
空白有带，证明有污染，在重复一次，如果空白没带了，说明是你操作出现问题；如果空白还是有一样的带，试剂有污染了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我就是我
4楼2012-04-01 00:20:22
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fwks

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢各位专家虫友！我再去排查一遍。 2012-04-01 11:20:01
水、枪头、PCR管、酶、引物本身都有可能是污染源，建议楼主从以上几方面进行逐个排除。
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5楼2012-04-01 09:15:14
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chenxy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先换新的水，不行的话换新的引物，再不行就换新的酶。
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行到水穷处，坐看云起时
6楼2012-04-01 09:42:00
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yixinyuan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
waldenpond: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢各位专家虫友！我再去排查一遍。 2012-04-01 11:20:25
种种情况我们以前也出现过,就是污染了.原因有很多:试剂,枪头,水都有可能有问题,建议重新做对照,排查原因.
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7楼2012-04-01 09:52:18
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-04-01 00:20:22:
空白有带，证明有污染，在重复一次，如果空白没带了，说明是你操作出现问题；如果空白还是有一样的带，试剂有污染了

全都换新的！！
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8楼2012-04-01 10:33:07
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
全部换新的，正解！
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我就是我
9楼2012-04-01 11:16:09
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hch123

金虫 (正式写手)
额  我最近也是这样 …………………………
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脚踏实地：遇一个，学一个，会一个。。。
10楼2012-04-01 12:08:35
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