| 查看: 2699 | 回复: 16 | ||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | ||||
danyzj01银虫 (正式写手)
|
[交流]
PCR提取试剂盒不见了，手动配置DNA提取试剂一般都需要准备哪些试剂？ 已有8人参与
|
|||
| 请问试剂的名称及其浓度是多少？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
joyfuldog» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教RNA提取高手：反转录PCR（RT-PCR)中DNA的去除
已经有18人回复
- 植物干样DNA提取试剂盒
已经有15人回复
- 提取土壤DNA，如何去除腐殖质等PCR抑制物？
已经有17人回复
- 用土壤DNA提取试剂盒提出的浓度有多大
已经有10人回复
- 土壤中含有农药，提取的土壤DNA进行PCR扩增，农药会抑制PCR反应吗
已经有5人回复
- 土壤微生物总DNA提取试剂盒选购
已经有29人回复
- 基因组DNA提取试剂盒
已经有11人回复
- 【求助/交流】DNA提取方法（用于PCR-DGGE）
已经有20人回复
- 【求助/交流】土壤DNA提取及PCR
已经有20人回复
- 【求助/交流】细菌基因组DNA提取试剂盒
已经有10人回复
- 【求助/交流】质粒DNA提取后的PCR
已经有12人回复
- 【求助/交流】请教DNA提取高手，什么试剂能使土壤中的细胞分散于溶液中？
已经有11人回复
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很详细了 2012-03-31 09:37:57
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很详细了 2012-03-31 09:37:57
|
嗯.................. 那么是说CTAB法提取DNA吧 那么我贴我自己的方案了: Reagents: CTAB Extraction Buffer: 50 mL 2 %(V/V) CTAB--------1.000 g 100mM Tris-Hydrochloric acid(pH 8.0)--------0.605 g 1.4M Sodium chloride--------4.091 g 20mM EDTA•Na2--------0.372 g Sterilize reagent and store at -4 °C ---------------------------------------------------------------------------------------------------- Wash Buffer: 20 mL 76 % Ethanol--------15.2 mL Anhydrous ethanol 10mM Ammonium acetate--------0.015 g Distill water--------up to 20 mL 自个有把Protocol翻译成英文的习惯，所以你凑合的看吧，这是用于我们提植物基因组DNA用的，不知是否能用于你的实验 希望有所帮助  若有错的话请高手指正 |
4楼2012-03-30 23:19:17
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
|
以前做的了： 我提的细胞的 手提基因组： 用胰蛋白酶消化HEL细胞，收集约106－108个细胞，500×g离心5min，弃上清 。再加入PBS重悬细胞，500×g离心5min，弃上清，将多余的PBS吸净。加入400μl裂解液（10mmol/L Tris pH 8.0，0.1mol/L EDTA，0.5% SDS），轻轻吹打，充分混匀，使细胞完全裂解。加入蛋白酶K至终浓度为100μg/ml，轻轻吹打，充分混匀，于50℃水浴中孵育3h。加入等体积的Tris饱和酚吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。再加入等体积氯仿∶异戊醇（24∶1）吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。加入等体积异丙醇，于－20℃沉淀过夜。12000×g离心10min，弃上清。用75％乙醇洗沉淀一次，12000×g离心10min，弃上清，室温干燥。加入50μl含RNase（浓度为20μg/ml）的TE（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA pH8.0）溶解DNA沉淀，可于37℃助溶。 手提质粒的那个配方没找到，只记得1，2,3,4号液了，用的是NaOH的碱裂解法 查了下，和这个http://shiyan.ebioe.com/3838.htm 差不多，只不过没他这个复杂，当时只是小题鉴定，没后面的RNA酶的部分。 [ Last edited by telomerase on 2012-4-3 at 14:15 ] |
13楼2012-04-03 13:49:42
atlanticwi
金虫 (正式写手)
琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
- MolEPI: 25
- 应助: 138 (高中生)
- 金币: 141.2
- 散金: 350
- 红花: 13
- 帖子: 536
- 在线: 313.2小时
- 虫号: 1099992
- 注册: 2010-09-15
- 专业: 植物生理与生化
2楼2012-03-30 20:43:22
danyzj01
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3234.7
- 散金: 126
- 红花: 1
- 帖子: 518
- 在线: 60小时
- 虫号: 1725610
- 注册: 2012-03-29
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
3楼2012-03-30 22:59:53
yjb3344
木虫 (正式写手)
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 1188.8
- 散金: 478
- 帖子: 444
- 在线: 114.7小时
- 虫号: 886880
- 注册: 2009-10-28
- 专业: 发育生物学
5楼2012-03-31 17:30:59
6楼2012-04-01 10:51:12
7楼2012-04-01 19:07:05
danyzj01
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3234.7
- 散金: 126
- 红花: 1
- 帖子: 518
- 在线: 60小时
- 虫号: 1725610
- 注册: 2012-03-29
- 性别: GG
- 专业: 药物毒理
8楼2012-04-01 19:13:26
nnxqwei
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 1
- 应助: 4 (幼儿园)
- 贵宾: 0.01
- 金币: 45841.4
- 散金: 66
- 红花: 110
- 帖子: 4845
- 在线: 784.1小时
- 虫号: 50626
- 注册: 2004-07-13
- 性别: GG
- 专业: 微生物学
9楼2012-04-02 08:54:51
10楼2012-04-02 20:51:48
