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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR提取试剂盒不见了，手动配置DNA提取试剂一般都需要准备哪些试剂？
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danyzj01

银虫 (正式写手)

[交流] PCR提取试剂盒不见了，手动配置DNA提取试剂一般都需要准备哪些试剂？ 已有8人参与

请问试剂的名称及其浓度是多少？
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1楼 2012-03-30 20:32:52
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回帖置顶 ( 共有2个 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很详细了 2012-03-31 09:37:57
嗯..................
那么是说CTAB法提取DNA吧
那么我贴我自己的方案了:
Reagents:
CTAB Extraction Buffer: 50 mL
2 %(V/V) CTAB--------1.000 g
100mM Tris-Hydrochloric acid(pH 8.0)--------0.605 g
1.4M Sodium chloride--------4.091 g
20mM EDTA•Na2--------0.372 g
Sterilize reagent and store at -4 °C
----------------------------------------------------------------------------------------------------
Wash Buffer: 20 mL
76 % Ethanol--------15.2 mL Anhydrous ethanol
10mM Ammonium acetate--------0.015 g
Distill water--------up to 20 mL

自个有把Protocol翻译成英文的习惯，所以你凑合的看吧，这是用于我们提植物基因组DNA用的，不知是否能用于你的实验
希望有所帮助若有错的话请高手指正
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Let God do with it as He wills
4楼2012-03-30 23:19:17
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
以前做的了： 我提的细胞的
手提基因组：
用胰蛋白酶消化HEL细胞，收集约106－108个细胞，500×g离心5min，弃上清 。再加入PBS重悬细胞，500×g离心5min，弃上清，将多余的PBS吸净。加入400μl裂解液（10mmol/L Tris pH 8.0，0.1mol/L EDTA，0.5% SDS），轻轻吹打，充分混匀，使细胞完全裂解。加入蛋白酶K至终浓度为100μg/ml，轻轻吹打，充分混匀，于50℃水浴中孵育3h。加入等体积的Tris饱和酚吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。再加入等体积氯仿∶异戊醇（24∶1）吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。加入等体积异丙醇，于－20℃沉淀过夜。12000×g离心10min，弃上清。用75％乙醇洗沉淀一次，12000×g离心10min，弃上清，室温干燥。加入50μl含RNase（浓度为20μg/ml）的TE（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA pH8.0）溶解DNA沉淀，可于37℃助溶。

手提质粒的那个配方没找到，只记得1，2,3,4号液了，用的是NaOH的碱裂解法
查了下，和这个http://shiyan.ebioe.com/3838.htm
差不多，只不过没他这个复杂，当时只是小题鉴定，没后面的RNA酶的部分。

[ Last edited by telomerase on 2012-4-3 at 14:15 ]
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
13楼2012-04-03 13:49:42
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普通回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
嗯................
是指提基因组DNA吗？为何说是PCR提取试剂盒？是指胶回收盒子？
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Let God do with it as He wills
2楼2012-03-30 20:43:22
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-30 20:43:22:
嗯................
是指提基因组DNA吗？为何说是PCR提取试剂盒？是指胶回收盒子？

就是DNA模版提取
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3楼2012-03-30 22:59:53
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yjb3344

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
到底是PCR还是DNA 呢？我是碱裂解法提得动物组织，很便宜 效果也很好 随便买点自己配置就OK了
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不论在世界的任何角落·都要感到幸福
5楼2012-03-31 17:30:59
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可帅儿

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+1, 有钱银 2012-04-01 17:52:37
我是用磁分离架吸附DNA的方法提取的，不过貌似洗脱液高盐，对PCR后续有影响
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追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
6楼2012-04-01 10:51:12
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real-gold

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-04-01 10:51:12:
我是用磁分离架吸附DNA的方法提取的，不过貌似洗脱液高盐，对PCR后续有影响

是用磁珠法试剂盒吗？自配的？
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7楼2012-04-01 19:07:05
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danyzj01

银虫 (正式写手)
这么复杂，我只是提取细菌的DNA，做16SDNA
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8楼2012-04-01 19:13:26
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by danyzj01 at 2012-04-01 19:13:26:
这么复杂，我只是提取细菌的DNA，做16SDNA

提取细菌的DNA，有质粒DNA或基因组DNA，你做的是16S rDNA，要的是基因组DNA，这和PCR提取试剂盒不见了有什么关系呀？！只有PCR产物纯化试剂盒。唉，思路不清哦。。。
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9楼2012-04-02 08:54:51
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可帅儿

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by real-gold at 2012-04-01 19:07:05:
是用磁珠法试剂盒吗？自配的？

不是，买的试剂盒，普洛麦格的~你需要吗？
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追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
10楼2012-04-02 20:51:48
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