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danyzj01银虫 (正式写手)
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PCR提取试剂盒不见了，手动配置DNA提取试剂一般都需要准备哪些试剂？ 已有8人参与
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| 请问试剂的名称及其浓度是多少？ |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
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以前做的了： 我提的细胞的 手提基因组： 用胰蛋白酶消化HEL细胞，收集约106－108个细胞，500×g离心5min，弃上清 。再加入PBS重悬细胞，500×g离心5min，弃上清，将多余的PBS吸净。加入400μl裂解液（10mmol/L Tris pH 8.0，0.1mol/L EDTA，0.5% SDS），轻轻吹打，充分混匀，使细胞完全裂解。加入蛋白酶K至终浓度为100μg/ml，轻轻吹打，充分混匀，于50℃水浴中孵育3h。加入等体积的Tris饱和酚吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。再加入等体积氯仿∶异戊醇（24∶1）吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。加入等体积异丙醇，于－20℃沉淀过夜。12000×g离心10min，弃上清。用75％乙醇洗沉淀一次，12000×g离心10min，弃上清，室温干燥。加入50μl含RNase（浓度为20μg/ml）的TE（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA pH8.0）溶解DNA沉淀，可于37℃助溶。 手提质粒的那个配方没找到，只记得1，2,3,4号液了，用的是NaOH的碱裂解法 查了下，和这个http://shiyan.ebioe.com/3838.htm 差不多，只不过没他这个复杂，当时只是小题鉴定，没后面的RNA酶的部分。 [ Last edited by telomerase on 2012-4-3 at 14:15 ] |
13楼2012-04-03 13:49:42
atlanticwi
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2楼2012-03-30 20:43:22
danyzj01
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3楼2012-03-30 22:59:53
atlanticwi
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很详细了 2012-03-31 09:37:57
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, MolEPI+1, 很详细了 2012-03-31 09:37:57
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嗯.................. 那么是说CTAB法提取DNA吧 那么我贴我自己的方案了: Reagents: CTAB Extraction Buffer: 50 mL 2 %(V/V) CTAB--------1.000 g 100mM Tris-Hydrochloric acid(pH 8.0)--------0.605 g 1.4M Sodium chloride--------4.091 g 20mM EDTA•Na2--------0.372 g Sterilize reagent and store at -4 °C ---------------------------------------------------------------------------------------------------- Wash Buffer: 20 mL 76 % Ethanol--------15.2 mL Anhydrous ethanol 10mM Ammonium acetate--------0.015 g Distill water--------up to 20 mL 自个有把Protocol翻译成英文的习惯，所以你凑合的看吧，这是用于我们提植物基因组DNA用的，不知是否能用于你的实验 希望有所帮助  若有错的话请高手指正 |
4楼2012-03-30 23:19:17
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