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danyzj01

银虫 (正式写手)

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9楼: Originally posted by nnxqwei at 2012-04-02 08:54:51:
提取细菌的DNA,有质粒DNA或基因组DNA,你做的是16S rDNA,要的是基因组DNA,这和PCR提取试剂盒不见了有什么关系呀?!只有PCR产物纯化试剂盒。唉,思路不清哦。。。

那应该如何提取细菌的DNA作为模板呢,需要自配什么溶剂
11楼2012-04-02 23:51:28
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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11楼: Originally posted by danyzj01 at 2012-04-02 23:51:28:
那应该如何提取细菌的DNA作为模板呢,需要自配什么溶剂

要是用CTAB法的话,看《分子克隆实验指南》会有详细的配方和方法呀
12楼2012-04-03 00:02:49
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
以前做的了: 我提的细胞的
手提基因组:
用胰蛋白酶消化HEL细胞,收集约106-108个细胞,500×g离心5min,弃上清 。再加入PBS重悬细胞,500×g离心5min,弃上清,将多余的PBS吸净。加入400μl裂解液(10mmol/L Tris pH 8.0,0.1mol/L EDTA,0.5% SDS),轻轻吹打,充分混匀,使细胞完全裂解。加入蛋白酶K至终浓度为100μg/ml,轻轻吹打,充分混匀,于50℃水浴中孵育3h。加入等体积的Tris饱和酚吹打混匀,12000×g离心10min,将上清移入一个新的EP管中。再加入等体积氯仿∶异戊醇(24∶1)吹打混匀,12000×g离心10min,将上清移入一个新的EP管中。加入等体积异丙醇,于-20℃沉淀过夜。12000×g离心10min,弃上清。用75%乙醇洗沉淀一次,12000×g离心10min,弃上清,室温干燥。加入50μl含RNase(浓度为20μg/ml)的TE(10 mmol/L Tris,1 mmol/L EDTA pH8.0)溶解DNA沉淀,可于37℃助溶。

手提质粒的那个配方没找到,只记得1,2,3,4号液了,用的是NaOH的碱裂解法
查了下,和这个http://shiyan.ebioe.com/3838.htm
差不多,只不过没他这个复杂,当时只是小题鉴定,没后面的RNA酶的部分。

[ Last edited by telomerase on 2012-4-3 at 14:15 ]
我的路靠我的脚踩出来!!!不走寻常路!!!
13楼2012-04-03 13:49:42
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real-gold

银虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-04-02 20:51:48:
不是,买的试剂盒,普洛麦格的~你需要吗?

可否告知货号  谢谢
14楼2012-04-05 21:33:55
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可帅儿

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by real-gold at 2012-04-05 21:33:55:
可否告知货号  谢谢

我查一下,是DC6700和DC6701 分别是100个反应和400个反应的
你可以到普洛麦格官网下载试剂说明书
追随自己的心!不要做让自己后悔的事!
15楼2012-04-06 09:53:02
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joyfuldog

木虫 (职业作家)

送鲜花一朵
有用
16楼2012-04-15 16:37:13
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)

送鲜花一朵
感谢楼主分享
17楼2012-04-30 10:34:06
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