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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR提取试剂盒不见了，手动配置DNA提取试剂一般都需要准备哪些试剂？
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by nnxqwei at 2012-04-02 08:54:51:
提取细菌的DNA，有质粒DNA或基因组DNA，你做的是16S rDNA，要的是基因组DNA，这和PCR提取试剂盒不见了有什么关系呀？！只有PCR产物纯化试剂盒。唉，思路不清哦。。。

那应该如何提取细菌的DNA作为模板呢，需要自配什么溶剂
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11楼2012-04-02 23:51:28
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nnxqwei

至尊木虫 (职业作家)
★
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引用回帖:
11楼: Originally posted by danyzj01 at 2012-04-02 23:51:28:
那应该如何提取细菌的DNA作为模板呢，需要自配什么溶剂

要是用CTAB法的话，看《分子克隆实验指南》会有详细的配方和方法呀
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12楼2012-04-03 00:02:49
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)

cain
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-15 21:26:06
以前做的了： 我提的细胞的
手提基因组：
用胰蛋白酶消化HEL细胞，收集约106－108个细胞，500×g离心5min，弃上清 。再加入PBS重悬细胞，500×g离心5min，弃上清，将多余的PBS吸净。加入400μl裂解液（10mmol/L Tris pH 8.0，0.1mol/L EDTA，0.5% SDS），轻轻吹打，充分混匀，使细胞完全裂解。加入蛋白酶K至终浓度为100μg/ml，轻轻吹打，充分混匀，于50℃水浴中孵育3h。加入等体积的Tris饱和酚吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。再加入等体积氯仿∶异戊醇（24∶1）吹打混匀，12000×g离心10min，将上清移入一个新的EP管中。加入等体积异丙醇，于－20℃沉淀过夜。12000×g离心10min，弃上清。用75％乙醇洗沉淀一次，12000×g离心10min，弃上清，室温干燥。加入50μl含RNase（浓度为20μg/ml）的TE（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA pH8.0）溶解DNA沉淀，可于37℃助溶。

手提质粒的那个配方没找到，只记得1，2,3,4号液了，用的是NaOH的碱裂解法
查了下，和这个http://shiyan.ebioe.com/3838.htm
差不多，只不过没他这个复杂，当时只是小题鉴定，没后面的RNA酶的部分。

[ Last edited by telomerase on 2012-4-3 at 14:15 ]
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我的路靠我的脚踩出来！！！不走寻常路！！！
13楼2012-04-03 13:49:42
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 可帅儿 at 2012-04-02 20:51:48:
不是，买的试剂盒，普洛麦格的~你需要吗？

可否告知货号  谢谢
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14楼2012-04-05 21:33:55
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可帅儿

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
14楼: Originally posted by real-gold at 2012-04-05 21:33:55:
可否告知货号  谢谢

我查一下，是DC6700和DC6701 分别是100个反应和400个反应的
你可以到普洛麦格官网下载试剂说明书
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追随自己的心！不要做让自己后悔的事！
15楼2012-04-06 09:53:02
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joyfuldog

木虫 (职业作家)
送鲜花一朵
有用
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16楼2012-04-15 16:37:13
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Lynn和Mia

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
感谢楼主分享
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17楼2012-04-30 10:34:06
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