应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量PCR的扩增曲线很奇怪，什么原因
51/1返回列表
查看: 8868  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR的扩增曲线很奇怪，什么原因 已有2人参与

第一次做荧光定量PCR，得到的扩增曲线很奇怪，不知道是什么原因，求指教！还有要是CT值过高是不是应该增加模板的浓度啊？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验 【分子生物】EPI帖 观-精-记

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-27 19:58:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-28 09:47:03:
嗯.....
个人看法：
为什么大家把溶解曲线看的这么重要呢，我觉得本末倒置了，若是你的扩增曲线都没有再一定范围内起峰的话，溶解曲线即使是单一峰又有什么用呢？况且你还要看峰的尖锐程度，峰的高低。我就说这 ...

非常感谢，我再做一次看看效果吧
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-28 10:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+4, 很热心很耐心！个人也认为是无扩增…… 2012-03-28 11:10:23
嗯........................
我是这样认为的：
你看到那个红色的线了吗，那应该是阙值线，如果你没有手动调整过的话，在阙值线以下的都是背景杂信号，忽上忽下的很正常，后边没有在一定范围内起峰，说明是无产物扩增的，如果你用的SYBR Green I 法，也同时会有溶解曲线分析吧，若那里边也是没有很尖锐的峰出现（我这里是笼统的说法），只能说明你这个扩增是没有产物出现的。而且你图不是很清晰，看不清楚纵轴是什么标示。
问题很多，不能在这一概而就的说明
希望有所帮助，如果有说错地方，请各位高手指点
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-03-27 20:27:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杜越欧

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-27 20:27:47:
嗯........................
我是这样认为的：
你看到那个红色的线了吗，那应该是阙值线，如果你没有手动调整过的话，在阙值线以下的都是背景杂信号，忽上忽下的很正常，后边没有在一定范围内起峰，说明是无产物 ...

非常感谢，但是我的溶解曲线有单一峰，而且特异性非常好啊。那就说明有扩增产物啊。那个阈值通常需要改动么？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-28 09:05:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 最近很犀利啊~Real-time产物跑胶是可行的，我自己也做过，嘿嘿~ 2012-03-28 11:12:13
引用回帖:
3楼: Originally posted by 杜越欧 at 2012-03-28 09:05:33:
非常感谢，但是我的溶解曲线有单一峰，而且特异性非常好啊。那就说明有扩增产物啊。那个阈值通常需要改动么？

嗯.....
个人看法：
为什么大家把溶解曲线看的这么重要呢，我觉得本末倒置了，若是你的扩增曲线都没有再一定范围内起峰的话，溶解曲线即使是单一峰又有什么用呢？况且你还要看峰的尖锐程度，峰的高低。我就说这么几个例子吧：
1. 以前用某乐的96-microplate，总在77~80度左右有单一小侧峰，考虑引物问题等众多事情后仍旧无解，最后同样实验条件使用某A的8-Strip tube，前边的杂峰消除。
2. 做过NTC，发现三重复都在38Ct时左右起峰，溶解曲线很单一，与内参同温度，但峰最高值是其一半左右，至今仍无解。
所以你只能有扩增才能用溶解来证明是不是扩增正确，而不能没扩增却用溶解来说明有扩增，如果实在不放心，那就那扩增产物跑胶，理论可行，但我没有试过。
那个阙值线的问题，你可以参照偶回答的帖子
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4305783&authorid=1099992
祝实验顺利
如有说错，请高手指点
赞一下(2人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
4楼2012-03-28 09:47:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿山大07化学 332分 四六级已过 本科山东双非 求调剂！ +3 不想理你 2026-03-16 3/150 2026-03-21 03:59 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +10 yy要上岸呀 2026-03-17 10/500 2026-03-21 03:14 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿武理材料工程348求调剂 +3 ￣^￣゜汗 2026-03-19 4/200 2026-03-20 21:01 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:35 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +5 枫桥ZL 2026-03-18 7/350 2026-03-19 14:52 by 功夫疯狂
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭