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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆不喜欢发脾气

MolEPI: 25
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 最近很犀利啊~Real-time产物跑胶是可行的，我自己也做过，嘿嘿~ 2012-03-28 11:12:13

引用回帖:

3楼: Originally posted by 杜越欧 at 2012-03-28 09:05:33:
非常感谢，但是我的溶解曲线有单一峰，而且特异性非常好啊。那就说明有扩增产物啊。那个阈值通常需要改动么？

嗯.....
个人看法：
为什么大家把溶解曲线看的这么重要呢，我觉得本末倒置了，若是你的扩增曲线都没有再一定范围内起峰的话，溶解曲线即使是单一峰又有什么用呢？况且你还要看峰的尖锐程度，峰的高低。我就说这么几个例子吧：
1. 以前用某乐的96-microplate，总在77~80度左右有单一小侧峰，考虑引物问题等众多事情后仍旧无解，最后同样实验条件使用某A的8-Strip tube，前边的杂峰消除。
2. 做过NTC，发现三重复都在38Ct时左右起峰，溶解曲线很单一，与内参同温度，但峰最高值是其一半左右，至今仍无解。
所以你只能有扩增才能用溶解来证明是不是扩增正确，而不能没扩增却用溶解来说明有扩增，如果实在不放心，那就那扩增产物跑胶，理论可行，但我没有试过。
那个阙值线的问题，你可以参照偶回答的帖子
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4305783&authorid=1099992
祝实验顺利