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xiaoyang123

金虫 (小有名气)

[交流] PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？

关于PCR的退火温度，以前一直认为温度提高特异性增强，但是太高的话会导致引物难以与模板接合，无法扩增出目的条带，而温度降低的话，可能非特异性不那么强，可能会扩增出杂带，但是目的条带也能扩出来。因此为了保证得到目的条带，往往倾向于选择较低的退火温度。然而实验中发现，温度较低时，有时扩增效果反而不好，目的条带很淡很淡。

是否退火温度过低，除了导致非特异性扩增增强，也会导致目的条带无法扩出呢？
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1楼2012-03-22 20:08:27
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:16:13
会的，退火温度太低会导致引物大量与非特异性位点结合，导致目的基因的扩增出现问题，比如dNTP的消耗等
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5楼2012-03-23 22:34:49
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-25 14:15:55
xiaoyang123: 金币+1 2012-03-27 19:31:00
PCR中可以调整的条金不止Tm一个，Mg浓度、引物、模版情况等都可以进行优化，不要纠结在这一个问题上。
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2楼2012-03-22 22:53:08
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huaigong5

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 有道理 2012-03-25 14:16:03
xiaoyang123: 金币+3 2012-03-27 19:31:57
如果引物特异性不好，非特异条带大量消耗DNTP等因子，就很可能P不出目的条带。
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3楼2012-03-23 04:48:06
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)
★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:16:20
那你就尝试做一个温度梯度PCR找找合适的温度，达到最佳效果
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4楼2012-03-23 20:02:24
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