应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？
51/1返回列表
查看: 3638  |  回复: 4
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xiaoyang123

金虫 (小有名气)

[交流] PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么？

关于PCR的退火温度，以前一直认为温度提高特异性增强，但是太高的话会导致引物难以与模板接合，无法扩增出目的条带，而温度降低的话，可能非特异性不那么强，可能会扩增出杂带，但是目的条带也能扩出来。因此为了保证得到目的条带，往往倾向于选择较低的退火温度。然而实验中发现，温度较低时，有时扩增效果反而不好，目的条带很淡很淡。

是否退火温度过低，除了导致非特异性扩增增强，也会导致目的条带无法扩出呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2012-03-22 20:08:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-25 14:15:55
xiaoyang123: 金币+1 2012-03-27 19:31:00
PCR中可以调整的条金不止Tm一个，Mg浓度、引物、模版情况等都可以进行优化，不要纠结在这一个问题上。
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-22 22:53:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huaigong5

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 有道理 2012-03-25 14:16:03
xiaoyang123: 金币+3 2012-03-27 19:31:57
如果引物特异性不好，非特异条带大量消耗DNTP等因子，就很可能P不出目的条带。
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-23 04:48:06
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

跳跳鱼

木虫 (著名写手)
★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:16:20
那你就尝试做一个温度梯度PCR找找合适的温度，达到最佳效果
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-23 20:02:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:16:13
会的，退火温度太低会导致引物大量与非特异性位点结合，导致目的基因的扩增出现问题，比如dNTP的消耗等
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-23 22:34:49
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaoyang123 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭