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xiaoyang123

金虫 (小有名气)


[交流] PCR退火温度态度会导致扩增不出目的条带么?

关于PCR的退火温度,以前一直认为温度提高特异性增强,但是太高的话会导致引物难以与模板接合,无法扩增出目的条带,而温度降低的话,可能非特异性不那么强,可能会扩增出杂带,但是目的条带也能扩出来。因此为了保证得到目的条带,往往倾向于选择较低的退火温度。然而实验中发现,温度较低时,有时扩增效果反而不好,目的条带很淡很淡。

是否退火温度过低,除了导致非特异性扩增增强,也会导致目的条带无法扩出呢?
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)


★ ★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-25 14:15:55
xiaoyang123: 金币+1 2012-03-27 19:31:00
PCR中可以调整的条金不止Tm一个,Mg浓度、引物、模版情况等都可以进行优化,不要纠结在这一个问题上。
2楼2012-03-22 22:53:08
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huaigong5

铁虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 有道理 2012-03-25 14:16:03
xiaoyang123: 金币+3 2012-03-27 19:31:57
如果引物特异性不好,非特异条带大量消耗DNTP等因子,就很可能P不出目的条带。
3楼2012-03-23 04:48:06
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)


★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:16:20
那你就尝试做一个温度梯度PCR找找合适的温度,达到最佳效果
4楼2012-03-23 20:02:24
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imyting

至尊木虫 (正式写手)


★ ★
xiaoyang123(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-03-25 14:16:13
会的,退火温度太低会导致引物大量与非特异性位点结合,导致目的基因的扩增出现问题,比如dNTP的消耗等
5楼2012-03-23 22:34:49
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