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w26150665w铜虫 (正式写手)
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EcoRI 酶切细菌基因组切不开
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为什么我用20ul体系酶切基因组切不开，酶切体系：ddH2O ；基因组1.5-2ul（OD比为1.85，纯度应该没问题）；10*H缓冲液 2ul；酶 0.4ul。酶切时间梯度6、7、8、9、10小时，结果仍然切不开基因组，请高手帮帮忙，不胜感激！ |
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 【分子生物】EPI帖 |
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3楼2012-03-22 21:38:58
酶切专家
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+2, 好吧，我记得你，你还在推荐你的软件呢 2012-03-23 14:41:52
w26150665w: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-03-23 22:17:45
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w26150665w: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-03-23 22:17:45
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有两个问题： 你的基因组DNA定量时，浓度时多少？也就是你酶切时的DNA总量是多少？ 你的buffer是H,应该用的是Takara的酶吧，你用其他有EcoRI位点的质粒测试过你的酶吗？没准，你的酶因为存储不当，已经失活了。 如果上述两个问题，你都清楚了，我建议你用Double digestion designer设计你的酶切反应体系。 http://www.bioinfomatics.cn/enzyme/login.php，可以申请免费使用。 我前不久，刚利用此系统成功设计了一个很困难的部分酶切，还不错，你可以试一试，希望对你有帮助。 |
2楼2012-03-22 20:34:09
w26150665w
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4楼2012-03-23 09:48:57
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5楼2012-03-23 09:50:37