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zhu_linying

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr 带好宽啊!苦恼,求助ing!

我从土壤中提取总DNA,用细菌通用引物F338-GC/R518,最近pcr出来的结果有两条离的很近的带,目的条带很宽,温度梯度都做了55-66,都是有两条很近的带,求高手相助,万分感谢!!
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zhu_linying

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gaoxiang6521 at 2012-03-20 09:30:09:
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外,
建议:
1、调整拍照的焦点和焦距,以MERKER条带清晰为标准;
2、做胶时充分熔解,并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子;
3、提高胶浓度。

另:楼主的marker可是 ...

是2000的,怎么样调整体系可以避免非特异性条带的出现呢,还是有别的更好的PCR方法?
8楼2012-03-20 13:49:52
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励应助!欢迎常来哈~ 2012-03-20 12:01:54
建议使用Mg2+浓度,更换电泳缓冲液,将低电压和电泳时间,调整上样量。感觉是有点弥散和拖尾,祝好
将相本无种★男儿当自强
2楼2012-03-20 09:03:00
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gaoxiang6521

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 条带比较小,提高胶浓度是个好办法! 2012-03-20 12:03:02
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外,
建议:
1、调整拍照的焦点和焦距,以MERKER条带清晰为标准;
2、做胶时充分熔解,并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子;
3、提高胶浓度。

另:楼主的marker可是DL2000?
3楼2012-03-20 09:30:09
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助! 2012-03-20 12:03:26
建议你跑一下page或者是将PCR产物稀释后作为模板再进行一下PCR
4楼2012-03-20 09:40:53
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