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zhu_linying

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!

我从土壤中提取总DNA，用细菌通用引物F338-GC/R518，最近pcr出来的结果有两条离的很近的带，目的条带很宽，温度梯度都做了55-66，都是有两条很近的带，求高手相助，万分感谢！！
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1楼 2012-03-20 00:16:58
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whb21

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhu_linying at 2012-03-20 13:52:24:
稀释多少倍啊？然后还是用原来的体系和程序么？循环，时间，温度多不变么，还是减少？麻烦您说具体点，我不太懂，你说的可是recordition PCR？

琼脂糖凝胶电泳的分辨率低，但聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）的就高得多了，可以将弥散的条带分开。
我以前也遇见过这情况，条带宽，稀释PCR产物500-1000倍左右（具体看你产物浓度）还用之前的程序跑一下看看，如果不行，试试提高退火温度
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10楼2012-03-20 15:19:31
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！欢迎常来哈~ 2012-03-20 12:01:54
建议使用Mg2+浓度，更换电泳缓冲液，将低电压和电泳时间，调整上样量。感觉是有点弥散和拖尾，祝好
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将相本无种★男儿当自强
2楼2012-03-20 09:03:00
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gaoxiang6521

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 条带比较小，提高胶浓度是个好办法！ 2012-03-20 12:03:02
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外，
建议：
1、调整拍照的焦点和焦距，以MERKER条带清晰为标准；
2、做胶时充分熔解，并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子；
3、提高胶浓度。

另：楼主的marker可是DL2000?
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3楼2012-03-20 09:30:09
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！ 2012-03-20 12:03:26
建议你跑一下page或者是将PCR产物稀释后作为模板再进行一下PCR
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4楼2012-03-20 09:40:53
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