应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western-blot实验结果，大家帮忙分析下
51/1返回列表
查看: 3282  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

迷情八月

金虫 (正式写手)

[交流] western-blot实验结果，大家帮忙分析下 已有4人参与

我最近在做一个关于纯化抗体的课题，抗原E-coli表达后，自己纯化的 ，跑胶的时候，发现比较纯，只有一条目的蛋白的主带。然后免疫小鼠 筛选杂交瘤细胞，抗体纯化后，用western检测抗体的纯度，实验结果如下图，上样孔分别是：Maker（自己做的，没预染，所以看不到）；阴性对照，Ecoli（1:10稀释）空菌；阴性对照，Ecoli（1:100稀释）裂解液；目的蛋白（1:10）稀释；目的蛋白（1:100）稀释；目的蛋白（1:500）稀释。目的大小23KD。
        实验结果，阴性对照孔两个基本上没有颜色，可以断定我们的抗体和细菌蛋白是没有交叉反应的；目的蛋白均能染出颜色，但令人纠结的是，为什么1:10稀释的目的蛋白（颜色最亮的那条）上方会多出一条带（对了一下maker，大约50左右）？
       这个实验结果是否能说明，我得到的抗体是纯的？求大神指点


[ Last edited by 迷情八月 on 2012-3-17 at 14:27 ]
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

日子妞儿

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-17 14:24:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcppp1974

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我估计会不会是你目标蛋白的二聚体？因为目标蛋白的MW=23 kDa,  23 x 2 = 46 kDa.在电泳水平上，46和50 kDa是很难区分的。更何况50 kDa你也是估计的。因此建议你加入ME或DTT（切断双硫键）后再试一次，如果是-SS-键，那你加入还原剂后就会变成一条带。希望该休息对你有用。
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-17 15:46:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

水水726

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是杂带的话，是不是你一抗浓度太大了，稀释下试试
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-17 21:10:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷情八月

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lcppp1974 at 2012-03-17 15:46:02:
我估计会不会是你目标蛋白的二聚体？因为目标蛋白的MW=23 kDa,  23 x 2 = 46 kDa.在电泳水平上，46和50 kDa是很难区分的。更何况50 kDa你也是估计的。因此建议你加入ME或DTT（切断双硫键）后再试一次，如果是-SS- ...

我上的是还原的buffer，我们自己也认为可能是形成二聚体了，会不会是二聚体的浓度太高了，DTT还来不及还原？
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-19 08:18:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcppp1974

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
蛋白样品中你最好用DTT，它能较稳定地把SS还原为SH，且要加大浓度，因为我推测你的目标蛋白中的SH很容易形成SS，因此要加过量的DTT。

还有，也许你的还原时间不够。还原条件：沸水，5min。常温，>5h.

仅供参考。
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-19 13:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:14 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:02 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-15 05:22 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-15 01:21 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭